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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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- 上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
- 網址：
- www.yeasen.com
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業,制藥/生物制藥 |
|---|
產品介紹
本產品銜接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309ES)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一鏈cDNA合成步驟。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA純化的產物、rRNA去除的產物等。由于在Cat#12309ES中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脫mRNA純化或rRNA去除操作中所得的RNA，沒有額外的體積用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已經溶解于Nuclease free ddH2O中，可選擇本產品進行RNA片段化或一鏈cDNA合成反應。
產品信息
貨號 | 13487ES08 / 13487ES24 / 13487ES96/13487ES98 |
規格 | 8 T / 24 T / 96 T/ 1000 T |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 13487ES08 | 13487ES24 | 13487ES96 | 13487ES98 |
13487-A | 4 × Frag/Prime Buffer | 32 μL | 96 μL | 384 μL | 4 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
當Input RNA不需要片段化處理時，請選擇方案A；當Input RNA需要片段化處理時，請選擇方案B。
A1. 若Input RNA無需片段化處理，可結合Cat#12309ES試劑，按照表1直接配制第一鏈cDNA合成反應體系。
表1 直接進行第一鏈cDNA合成反應體系
名稱 | 體積 (μL) |
Input RNA | 13 |
4×Frag/Prime Buffer | 4 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
A2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底，按照表2反應程序于PCR儀中進行一鏈合成反應。一鏈合成產物可銜接Cat#12309ES進行后續反應。
表2 第一鏈cDNA合成反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋 105°C | On |
25 °C | 10 min |
42°C | 15 min |
70°C | 15 min |
4°C | Hold |
B1. 若Input RNA需要進行片段化處理，可按照3配制片段化體系進行RNA片段化。
表3 片段化反應體系
名稱 | 體積 (μL) |
Input RNA | 13 |
4×Frag/Prime Buffer | 4 |
Total | 17 |
B2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底，根據Input RNA的完整度和實驗目的，參考Cat#12309ES說明書設置合適的片段化條件。
B3. 片段化產物進行一鏈cDNA合成，按照表4配制一鏈cDNA合成反應體系。
表4 第一鏈cDNA合成反應體系
名稱 | 體積 (μL) |
Fragmented RNA | 17 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
B4. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底，按照表2反應程序于PCR儀中進行一鏈合成反應。一鏈合成產物可銜接Cat#12309ES進行后續反應。
注意事項
1. 本產品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
4. Input RNA請溶于Nuclease free ddH2O，避免Mg2+的存在干擾片段化效果；Input RNA最大投入體積為13 μL，在進行洗脫時請注意洗脫體積的選擇。
