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PNAS：利用人體干細胞培育出顎骨2009/10/26

PNAS：利用人體干細胞培育出顎骨科學家在實驗室使用人的成體干細胞培育出部分顎骨。他們指出，這是*次通過這種方法制成復雜的大小適合于解剖的骨骼，他們希望這種技術不僅能治療這種特殊關節的疾病，還能矯正其他骨骼的問題。哥倫比亞大學的這個研究結果公布在《美國科學院院刊》上。實驗室合成的骨骼是顳下頜關節。這一關節的問題可能由出生缺陷、關節炎或者損傷造成。雖然該關節的問題很常見，但它很難治療。該關節有著復雜的結構，這使得它很難通過移植身體其他部位的骨骼進行修復。在這項新研究中，科學家用到了人骨髓中的干細胞

Science：用心臟干細胞育出心臟肌肉組織2009/10/26

美國研究人員成功地利用心臟干細胞在實驗室中培育出心臟肌肉組織，這將為人類心臟病治療帶來突破。這一研究成果發表在zui近的《科學》雜志網絡版上。盡管現代醫學已經相當發達，但醫生仍然找不到簡單、快捷的方法治療因心臟病發作導致的心臟組織破損。研究*、哈佛大學干細胞研究所的肯尼思·建介紹，美國科學家兩個月前剛剛發現心臟干細胞，這為他和研究人員人工“制造”心臟肌肉組織提供可能。建說，研究人員把細胞置于一層薄薄的高分子膜上，讓它們成環形排列。這些細胞會自發重新組合，zui后形成一片心臟組織，這塊組織的形狀則

國家火炬計劃優先發展技術領域（2010年）之環境保護領域2009/10/26

國家火炬計劃優先發展技術領域（2010年）之環境保護領域我國人口眾多，資源相對不足，生態環境脆弱。資源與環境問題正日益成為我國生存和可持續發展的首要問題。在經濟持續增長我國人均資源短缺，資源開發利用水平低，對環境造成的污染嚴重，面臨比其它國家更大的資源和環境壓力。黨中央、國務院提出重點突出全面貫徹科學發展觀，依靠各行各業努力建設資源節約型、環境友好型社會。在實現經濟增長方式轉變的過程中，完成節能、減排、節水三個約束性指標。通過以環境優化經濟增長的新思路、新要求來實現我國環境生態狀況的根本好轉，作

ELISA方法的及步驟2009/06/23

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物

ELISA方法詳細過程及步驟2009/06/22

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物

免疫膠體金技術（Immune colloidal gold technique）2009/06/22

一）原理免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒

免疫共沉淀 簡介2009/06/17

蛋白質間相互作用研究方法：免疫共沉淀1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。2．將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以zui大速度離心15min。3．收集上清（約30ml）并加入30μg的適當抗體，4℃搖動免疫沉淀物1h。4．加入0.9ml的蛋白質A-Sepharose懸液，4℃搖動免疫沉淀物30min。5．用含900mmol/LNaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物，再重復洗5次。zui后，用NE

抗原的制備方法2009/06/17

除完整的細胞可作為抗原外，各種不同的細胞內存在的各種分子量不同的物質，也都具有全抗原或半抗原的性質，某種抗原物質可能是某一類細胞所*的，可作為這種細胞的一個標志。由于細胞存在著許多性質不同的抗原物質，有時要從這眾多的物質中提取、純化某種抗原物質，以供科學研究之用。一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細致的工作，要制備一個高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學、化學和生理學等許多領域的知識。根據物理或化學特性建立起來的分離、純化方法的主要原理不外乎科二個方面：①利用混合物中幾個組分分配

ICC用細胞抗原的制備2009/06/17

一、材料和試劑1、0.01MPBS（pH7.4）：NaCl8.0g；KCl0.2g；Na2HPO41.44g；KH2PO40.24g；ddH2O至1000ml；高壓滅菌,分裝。2、0.25%胰酶：稱取EDTA0.02gNaCl0.8gKCl0.04g加三蒸水100ml溶解后加0.25g胰酶,輕輕攪動,使胰酶溶解,不要產生泡沫,加酚紅少許,調PH值到8.2-8.6,過濾除菌,分裝10ml/管,-20℃保存,臨用前預溫到37℃。3、誘導液（TPA）：12-鄰-十四酰-佛波醇-13-乙酸酯（12-O-

雙向瓊脂擴散實驗2009/06/17

雙向瓊脂擴散實驗，是將抗原和相應抗體分別加入同一凝膠板內的相鄰小孔中。兩者相互擴散,當擴散到他們的濃度比例合適的部位相遇時,就會形成抗原抗體復合物的沉淀。二、操作步驟1.取一塊干凈的玻璃板，用少量75%乙醇沖洗，晾干后置于水平臺，將1%瓊脂糖融化，56℃水浴中保溫。2.將瓊脂糖鋪于玻璃板上，厚度約為1㎜。3.打孔，孔距為4㎜，4.將抗血清按二倍稀釋法稀釋成1:2,1:4,1:8,1:16,1:32的不同濃度。在周圍孔中加入不同濃度的抗體，中心孔加抗原。將凝膠板置于濕盒內，室溫過夜，觀察結果三、實

HLA分型技術2009/06/17

HLA分型技術主要組織相容性復合物（MHC）是脊椎動物體內zui復雜且具有高度多態性的基因群。1984年GeorgeSnell發現小鼠MHC即H－2，1958年Dausset發現了人的MHC即HLA基因。MHC的表達產物稱為主要組織相容性抗原，MHC抗原是有核細胞表面膜蛋白分子，對抗原遞呈和免疫信號傳遞起關鍵作用。HLA基因，位于6號染色體上短臂上，長約4000Kb。HLA是目前所知人體zui復雜的遺傳多態性系統，有幾十個基因座位，每個基因座位又有幾十個等位基因，且呈共顯性表達。由于MHC基因位

凝膠沉淀反應2009/06/17

一、單相瓊脂擴散試驗原理一種定量試驗，將一定量的抗體混合于瓊脂內，傾注于玻片上，凝固后，在瓊脂層上打孔，再將抗原加入孔中，使其向四周擴散?？乖贵w復合物形成的沉淀環直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標準抗原制成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從標準曲線中求出。本試驗主要用于檢查標本中各種免疫球蛋白和血清IgG含量。材料１．抗體：羊抗人IgG單價抗血清。２．抗原：待檢血清。３．３％生理鹽水瓊脂、生理鹽水、載玻片、直徑３mm打孔器、小三角燒瓶、毛細滴管、濕盒。方法1、制備含抗體的瓊脂板取

間接凝集反應（類風濕因子檢測） 2009/06/17

原理類風濕因子（rheumatoidfactorRF）是抗人或動物IgGFc段的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。IgM型RF被認為是RF的主要類型，也是臨床免疫檢驗中常規方法所測定的類型。IgG吸附于聚苯乙烯膠乳顆粒上作為檢測試劑，在反應介質中，待檢血清中如含有RF，可與膠乳顆粒出現凝集反應。這是檢測IgM型RF的常用方法，但此方法只能定性或以滴度半定量，其靈敏度和特異性均不高，且只能檢出血清中的IgM型RF。檢測方法：膠乳顆粒凝集試驗即一定稀釋度的待檢血清+Ig-膠乳顆粒1~2滴凝集與

血清學技術2009/06/17

握體外抗原抗體反應的特點和影響因素；掌握經典的體外抗原抗體反應的原理、方法和應用。*節免疫血清的制備免疫血清的制備是一項常用的免疫學實驗技術。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學診斷的試劑（如用于制備免疫標記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應答性的機體，?？色@得價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的

ELISA的操作要點2009/06/17

的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規定操作，必能得出準確的結果。4.1標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如

ELISA實驗質量控制問題2009/06/17

從1949年美國CollegeofAmericanPathologists（簡稱CAP）首先開始研究臨床實驗室室內質量控制（簡稱質控）問題，美國學者Levery和Jenning于1950年發表*篇關于使用質控圖的實驗室室內質控，臨床檢驗實驗室的室內質控工作正式拉序幕。到70年代，實驗室質量控制進入一個新的階段--全面質量管理，推行GoodLaboratoryParctice（簡稱GLP）。進入80年代末期，GLP的統一標準產生了，發展到"認證實驗室"管理階段。全面質量管理的宗旨在于預防差錯的產生

ELISA試劑的臨床質量評價2009/06/17

ELISA試劑的評價（evaluation）分兩個方面：一是試劑本身的質量評價，符合一定要求后才能生產供應；一是在臨床應用中效果的評價。以肝炎ELISA診斷試劑為例，首先必須通過中國藥品生物制品檢定，以得到生產的許可。檢定內容除包裝、標簽、說明書等外，對試劑的性能，如特異性、靈敏度、精密度和線性等均需逐項檢定，通過對一系列參比品的檢測，結果符合要求者才為合格。ELISA試劑的臨床質量評價是用該試劑對臨床樣本進行檢測，以觀察其實際應用價值。部臨檢中心對乙肝ELISA診斷試劑在這方面進行了工作，通過

ELISA的概念、原理、操作步驟2009/06/17

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物

影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法2009/06/17

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；3

酶聯免疫吸附實驗（ELISA）基本原理2009/06/16

基本原理1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步