主要用途

石蠟切片TUNEL測定試劑是一種旨在使用標準化的化學(xué)方法，包括石蠟分離、無熱性酶消解等完整步驟，從存檔中的石蠟包埋的組織切片中探尋DNA斷點，即運用修飾過的核苷酸，在末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）的幫助下，對DNA單鏈或雙鏈上斷點處的3’末端進行標記，原位探測和定量分析單細胞水平的DNA降解狀況的經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的DNA降解測定。廣泛用于細胞凋亡的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，反應(yīng)敏感，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

產(chǎn)品內(nèi)容

去石蠟液（Reagent A）      150毫升

補水液A（Reagent B）  50毫升

補水液B（Reagent C）  50毫升

補水液C（Reagent D）  50毫升

補水液D（Reagent E）  50毫升

清理液（Reagent F）  60毫升

酶解液（Reagent G） 500微升

終止液（Reagent H） 500微升

酶標液（Reagent I） 500微升

染色液（Reagent J） 500微升

顯色液A（Reagent K） 500微升

顯色液B（Reagent L）   5毫升

強化液（Reagent M）       50微升

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存酶解液（Reagent G）、酶標液（Reagent I）、染色液（Reagent J）和顯色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，嚴格避免反復(fù)凍融，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent J）和顯色液A（Reagent K），避免光照；有效保證6月

用戶自備

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

特別注意

1. 酶標液（Reagent G）不能在室溫下凍融，而必須在冰槽里凍融，凍融后即刻使用；嚴禁反復(fù)凍融；考慮分裝，以備下次使用
2. 顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）必須在實驗操作前即刻混勻；混勻后切忌久放不用或儲存后備用；用完扔掉
3. 顯色液A（Reagent K）如果出現(xiàn)沉淀，須過濾后再用
4. 每次移取試劑，須更換槍頭，以免污染母液，影響結(jié)果
5. 石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛或常規(guī)固定液4℃條件下，固定16小時，否則組織易脫落

實驗步驟

• 去石蠟處理
• 取出10片待測的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
• 放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的補水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

二、 蛋白消解處理

• 小心加上50微升酶解液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育15分鐘
• 小心移去切片上的酶解液（Reagent G）
• 小心加上50微升終止液（Reagent H），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的終止液（Reagent H）
• 室溫下，將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 斷點標記處理
• 小心加上50微升含有酶標液（Reagent I），鋪滿整個切片樣品表面
• 在37℃濕潤的培養(yǎng)箱里，孵育1小時，保持濕潤，避免干燥
• 小心移去切片上的酶標液（Reagent I）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

四、 樣本染色處理

在染色前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的顯色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取200微升顯色液A（Reagent K）和1.8毫升顯色液B（Reagent L）到2毫升離心管，再加入10微升強化液（Reagent M），充分混勻，標記為顯色工作液，置于暗室。然后進行下列操作：

• 小心加上50微升染色液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的染色液（Reagent J）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加上100微升含有顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）的顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現(xiàn)棕褐色
• 小心移去切片上含有顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）的顯色工作液
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中浸泡5秒
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• （選擇步驟）進行甲基綠復(fù)染（注意：建議使用甲基綠復(fù)染試劑盒－GMS40010）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽性細胞呈現(xiàn)棕褐色

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 本產(chǎn)品為生物素標記，超過熒光素標記強度1000倍
• 本產(chǎn)品無需POD轉(zhuǎn)換，直接在光學(xué)顯微鏡下觀察，既方便，又確保信號不受影響
• 操作時須戴手套，以防污染
• 石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛或常規(guī)固定液4℃條件下，固定16小時，否則造成樣品支離破碎
• 酶標液（Reagent I）溫度敏感，嚴禁反復(fù)凍融
• 清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重復(fù)使用
• 所有操作在室溫下進行，除酶標孵育外
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干。空氣中晾干狀態(tài)為沒有水滴，呈濕潤狀態(tài)，可見反光
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 細胞顯色，避免過度，密切目測觀察，控制時間
• 細胞顯色完成后，即刻進行光學(xué)顯微鏡觀察
• 本公司提供系列細胞凋亡試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰