大鼠肝組織免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)
- 公司名稱 伊萊博生物科技（上海）有限公司
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- 更新時(shí)間 2025/5/20 15:06:10
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| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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一、樣本處理與模型構(gòu)建
?樣本制備?
肝組織需經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片（5μm）或冷凍切片（8-10μm），脫蠟后需抗原修復(fù)處理
肝硬化模型可通過CCl?皮下注射或膽總管結(jié)扎（BDL）誘導(dǎo)，纖維化評估需結(jié)合Masson染色
卵圓細(xì)胞增殖模型采用2-乙酰氨基芴（2-AAF）灌胃聯(lián)合肝部分切除術(shù)，可檢測OV6、CK19等標(biāo)志物
?病毒檢測?
乙型肝炎病毒（HBV）檢測中，HBsAg陽性反應(yīng)物分布于肝細(xì)胞胞核、胞漿及胞膜，HBcAg則主要位于胞核和胞漿
二、免疫組化操作流程
?染色方法?
常用SABC法或熒光標(biāo)記，一抗孵育條件多為4℃過夜（如檢測α-SMA、Collagen I等纖維化標(biāo)志物）
阻斷內(nèi)源性過氧化物酶需3% H?O?處理，血清封閉時(shí)間建議30分鐘
?信號檢測?
DAB顯色后，陽性信號表現(xiàn)為棕黃色顆粒（如PCNA檢測需觀察細(xì)胞核著色）
熒光染色需避光操作，常用Cy3/FITC標(biāo)記二抗
三、結(jié)果分析與應(yīng)用
?病理評估?
肝纖維化模型中，活化的肝星狀細(xì)胞（HSCs）可通過α-SMA、GFAP抗體鑒別，門脈區(qū)成纖維細(xì)胞則顯示Vinculin陽性
褪黑素干預(yù)后，PI3K/AKT通路蛋白（如P-AKT）表達(dá)降低提示抗纖維化效應(yīng)
?定量方法?
使用圖像分析軟件計(jì)算陽性區(qū)域面積比（如丹參酮ⅡA可抑制肝衰竭組織PCNA表達(dá)）
四、注意事項(xiàng)
病毒檢測時(shí)需設(shè)陰性對照，HBV/HEV共感染樣本可能出現(xiàn)100% HEV陽性率
冷凍切片應(yīng)避免反復(fù)凍融，石蠟切片脫蠟低易導(dǎo)致非特異性染色
動物模型需規(guī)范分組（如褪黑素劑量需設(shè)2.5-10mg/kg梯度）
如需特定蛋白（如AFP、CD34）的檢測方案，可結(jié)合雙染技術(shù)或原位雜交進(jìn)一步驗(yàn)證
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