蛋白質總巰基檢測試劑盒（總半巰基）
具體成交價以合同協議為準
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/25 19:11:46
- 訪問次數 292
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保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項
1.試劑拆封后請盡快使用完！
2.試劑A低溫保存后可能會有結晶析出，可以置室溫搖勻溶解或者37℃水浴溶解搖勻。
2.試劑A低溫保存后可能會有結晶析出，可以置室溫搖勻溶解或者37℃水浴溶解搖勻。
有效期
6個月
檢測方法
分光光度計
適用樣本
蛋白質、抗體等
產品應用
分光光度計
儀器準備
1.分光光度計
2.恒溫水浴鍋
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.恒溫水浴鍋
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.生理鹽水
2.純水
3.蛋白定量試劑盒
2.純水
3.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.比色皿
2.試管
3.吸頭
4.一次性手套
2.試管
3.吸頭
4.一次性手套
使用注意事項
1.試劑A低溫保存后可能會有結晶析出，可以置室溫搖勻溶解或者37℃水浴溶解后搖勻再使用。
2.試劑B2干粉開蓋使用前先敲入瓶底部，防止開蓋時灑落導致損失。
3.試劑C2干粉開蓋使用前先敲入瓶底部，防止開蓋時灑落導致損失
2.試劑B2干粉開蓋使用前先敲入瓶底部，防止開蓋時灑落導致損失。
3.試劑C2干粉開蓋使用前先敲入瓶底部，防止開蓋時灑落導致損失
使用方法
試劑配制：
1. 使用前，準確吸取10 ml試劑B1加入試劑B2干粉，充分溶解混勻，即成試劑B工作液，4℃避光保存備用。
2. 使用前，準確吸取10 ml試劑C1加入試劑C2干粉，充分溶解混勻，即成試劑C工作液，4℃避光保存備用。
【注】：
? 一次用不完的試劑工作液可以根據實驗需要分裝后-20℃凍存。
樣本處理：
1. 蛋白質/抗體等液體樣本：直接檢測或稀釋后檢測。
檢測前進行蛋白濃度測定（mg/ml，g/L）。
2. 固體粉末用試劑A溶解后測定。蛋白濃度范圍在1-10mg/ml均可。
進行蛋白濃度測定（mg/ml，g/L）。
總巰基的測定
1. 待測蛋白樣品100 μl加入700 μl試劑A，充分混勻，室溫或37℃靜置1-4小時。
2. 再加入100 μl試劑B工作液，充分混勻，在室溫或37℃靜置10-30分鐘。
3. 加入100 μl試劑D，充分混勻。
4. 冰浴或4℃冰箱靜置30分鐘以上。
【注】：
? 可以4℃靜置過夜。
5. 在4℃，12000×g以上條件下離心10分鐘。
6. 小心移除上層清液丟棄，留沉淀。
【注】：
? 盡可能吸干液體，小心不要吸走沉淀。
7. 加入100 μl試劑E到離心管中，洗滌沉淀。在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。小心移除棄上清，留沉淀。
【注】：
? 重復此步驟兩次。
? 盡可能吸干液體，小心不要吸走沉淀。
8. 用900 μl試劑F溶解沉淀。
【注】：
? 用移液器充分吹打混勻。
? 沉淀不好溶解時可以超聲助溶。
9. 加入100 μl試劑C工作液，充分混勻。
10. 置室溫靜置10分鐘。412 nm，0.5 cm光徑，測定OD值。
巰基含量計算：
總半巰基含量（mmol/g ；mmol-SH/g-Protein）
= 測定吸光度÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
? 以上以0.5cm光徑檢測設備為例，如果實際使用的檢測設備是采用1cm光徑，將計算公式中的0.5換成1即可。
【注】：
14.15 mM/cm為毫摩爾消光系數；
0.5 cm為光徑；
10 為反應總體積/樣品取樣量
1. 使用前，準確吸取10 ml試劑B1加入試劑B2干粉，充分溶解混勻，即成試劑B工作液，4℃避光保存備用。
2. 使用前，準確吸取10 ml試劑C1加入試劑C2干粉，充分溶解混勻，即成試劑C工作液，4℃避光保存備用。
【注】：
? 一次用不完的試劑工作液可以根據實驗需要分裝后-20℃凍存。
樣本處理：
1. 蛋白質/抗體等液體樣本：直接檢測或稀釋后檢測。
檢測前進行蛋白濃度測定（mg/ml，g/L）。
2. 固體粉末用試劑A溶解后測定。蛋白濃度范圍在1-10mg/ml均可。
進行蛋白濃度測定（mg/ml，g/L）。
總巰基的測定
1. 待測蛋白樣品100 μl加入700 μl試劑A，充分混勻，室溫或37℃靜置1-4小時。
2. 再加入100 μl試劑B工作液，充分混勻，在室溫或37℃靜置10-30分鐘。
3. 加入100 μl試劑D，充分混勻。
4. 冰浴或4℃冰箱靜置30分鐘以上。
【注】：
? 可以4℃靜置過夜。
5. 在4℃，12000×g以上條件下離心10分鐘。
6. 小心移除上層清液丟棄，留沉淀。
【注】：
? 盡可能吸干液體，小心不要吸走沉淀。
7. 加入100 μl試劑E到離心管中，洗滌沉淀。在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。小心移除棄上清，留沉淀。
【注】：
? 重復此步驟兩次。
? 盡可能吸干液體，小心不要吸走沉淀。
8. 用900 μl試劑F溶解沉淀。
【注】：
? 用移液器充分吹打混勻。
? 沉淀不好溶解時可以超聲助溶。
9. 加入100 μl試劑C工作液，充分混勻。
10. 置室溫靜置10分鐘。412 nm，0.5 cm光徑，測定OD值。
巰基含量計算：
總半巰基含量（mmol/g ；mmol-SH/g-Protein）
= 測定吸光度÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
? 以上以0.5cm光徑檢測設備為例，如果實際使用的檢測設備是采用1cm光徑，將計算公式中的0.5換成1即可。
【注】：
14.15 mM/cm為毫摩爾消光系數；
0.5 cm為光徑；
10 為反應總體積/樣品取樣量
常見問題分析
1.巰基含量低于預期？
可能是樣品中的游離巰基已經被氧化。
需要限度地減少樣品制備與分析之間的時間間隔，盡快完成分析測定。可以在樣品中加入1-5 mM 的EDTA以螯合可能氧化巰基的二價金屬離子。
2.需要繪制標準曲線嗎？
由于Ellman反應的顯色產物摩爾消光系數高且穩定，因此可以不必繪制標準曲線，直接通過摩爾消光系數計算即可。
如果需要可以選擇貝博其它含有標準品的試劑盒（相關產品：BB-472462或者BB-472463）。
如果需要自行繪制標準曲線，可以使用半鹽酸鹽一水合物（CAS#：7048-04-6 MW=175.63）做標準品，用反應緩沖液配制1.5 mM的標準品，然后分別稀釋成1.25 mM、1.0 mM、0.75 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0 mM等不同濃度的標準品。取900 μl加入100 μl試劑C工作液，充分混勻。置室溫靜置10分鐘。412 nm，測定OD值。
可能是樣品中的游離巰基已經被氧化。
需要限度地減少樣品制備與分析之間的時間間隔，盡快完成分析測定。可以在樣品中加入1-5 mM 的EDTA以螯合可能氧化巰基的二價金屬離子。
2.需要繪制標準曲線嗎？
由于Ellman反應的顯色產物摩爾消光系數高且穩定，因此可以不必繪制標準曲線，直接通過摩爾消光系數計算即可。
如果需要可以選擇貝博其它含有標準品的試劑盒（相關產品：BB-472462或者BB-472463）。
如果需要自行繪制標準曲線，可以使用半鹽酸鹽一水合物（CAS#：7048-04-6 MW=175.63）做標準品，用反應緩沖液配制1.5 mM的標準品，然后分別稀釋成1.25 mM、1.0 mM、0.75 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0 mM等不同濃度的標準品。取900 μl加入100 μl試劑C工作液，充分混勻。置室溫靜置10分鐘。412 nm，測定OD值。
參考文獻
1.HanQuanWen et al.
Effect of chirality of cysteine on the cell growth and photo-fermentative hydrogen production by using acetate as substrate
Fuel 2021 （IF=6.609）
2.Yan Yan et al.
Nanosized functional miRNA liposomes and application in the treatment of TNBC by silencing Slug gene
International Journal of Nanomedicine 2019 （IF=6.400）
3.HanQuanWen et al.
Enhanced photo-fermentative hydrogen production by synergistic effects of formed biofilm and added L-cysteine
Renewable Energy 2019 （IF=8.001）
4.MengGe Sun et al.
Targeting Epirubicin Plus Quinacrine Liposomes Modified with DSPE-PEG2000-C(RGDfK) Conjugate for Eliminating Invasive Breast Cancer
Journal of Biomedical Nanotechnology 2015 （IF=5.068）
Effect of chirality of cysteine on the cell growth and photo-fermentative hydrogen production by using acetate as substrate
Fuel 2021 （IF=6.609）
2.Yan Yan et al.
Nanosized functional miRNA liposomes and application in the treatment of TNBC by silencing Slug gene
International Journal of Nanomedicine 2019 （IF=6.400）
3.HanQuanWen et al.
Enhanced photo-fermentative hydrogen production by synergistic effects of formed biofilm and added L-cysteine
Renewable Energy 2019 （IF=8.001）
4.MengGe Sun et al.
Targeting Epirubicin Plus Quinacrine Liposomes Modified with DSPE-PEG2000-C(RGDfK) Conjugate for Eliminating Invasive Breast Cancer
Journal of Biomedical Nanotechnology 2015 （IF=5.068）
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