分析原理
在均相時間分辨熒光（HTRF）相互作用分析中，一部分（直接或間接）用供體進行標記，另一部分用受體進行標記（同樣直接或間接）。信號強度與兩部分的結合程度成正比。在此處所示的示例中：鏈霉親和素 - 鋱穴狀化合物與化的標記部分 A 結合，而B部分 * 與用 HTRF 受體標記的特異性抗體結合。* B部分也可以是化、帶有標簽、Fc 融合的。在這些情況下，使用相應的用受體標記的 HTRF 試劑（抗標簽、抗物種、蛋白 A、鏈霉親和素）進行檢測。

分析方案
如下示例描述了使用 20 µL 最終分析體積檢測化標記的A部分和未標記的 B部分* 之間相互作用的方案。分裝兩部分（10 µL），孵育，加入鏈霉親和素 - 鋱穴狀化合物（5 µL）和用受體標記的抗 B部分（5 µL），孵育并讀取。* B部分也可以帶有標簽、Fc 融合或直接標記。在這些情況下，使用相應的用供體標記的 HTRF 試劑（抗標簽、抗物種、蛋白 A、鏈霉親和素）進行檢測。

分析細節
測試次數與活性部分有何關系？

每個孔的平均結合物數量反映了總體生物材料含量。通常優選使用活性部分的量而不是總結合物的量。對于穴狀化合物和 d2 結合物，總結合物的量等于活性部分的量，因為標記的分子量可以忽略不計。對于用 XL665 標記的實體則不是這樣，總結合物的量將根據 XL665 結合物的最終摩爾比而變化，但是，由 Revvity 提供的活性部分的量是恒定的，并基于訂購的測試次數。

A

穴狀化合物和 XL665 結合物的推薦用量
穴狀化合物結合物不能過量，以防止讀數器飽和和不可接受的背景水平。在大多數情況下，1 至 5nM 的穴狀化合物濃度是合適的，并且根據所使用的與 HTRF 兼容的讀數器，在 620nm 處將產生 20,000 至 80,000 cps。XL665 結合物必須盡可能與其分析對應物匹配，以便最大數量的生物分子被 XL665 受體標記。因此，要在 20nM 的分析濃度下檢測標記分子，抗標簽 - XL665 的濃度應是等摩爾或更高。