甲醛脫氫酶（Formaldehyde Dehydrogenase，FDH）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

甲醛是一種能與蛋白質、核酸和脂類產生非特異性反應的活潑化合物，對所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶（ADH）的家庭成員之一，廣泛存在于原核和真核生物中，該酶能利用NAD+作為輔酶，將有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途徑中的關鍵酶。

測定原理：

甲醛脫氫酶催化甲醛和 NAD+產生NADH，在 340nm 處的吸光值會增加，測定 340nm 處的吸光值變化，可計算得到甲醛脫氫酶的活性。

甲醛脫氫酶試劑盒   輔酶Ⅰ系列-常備現貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 6ml 水溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前加入 1.5ml 水溶解待用。

自備儀器和用品：

天平、離心機、酶標儀、96 孔板、蒸餾水。

FDH 提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min。

2. 細胞：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 液體：直接檢測。

測定操作表：

1、酶標儀預熱 30min，調節波長至 340nm。

2、操作表在 96 孔板中加入如下試劑

混勻，于 340nm 下測定初始吸光值A1 與 5min 后的吸光值A2，△A=A2-A1。若樣本數量較多，可將試劑按比例配成工作液使用。

FDH 酶活計算：

（1） 按蛋白濃度計算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。

FDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

（2） 按樣本質量計算

DA ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T = 643×△A÷Cpr e′ d

酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。

FDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=

（3） 按照細胞數量計算

DA ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T =643×△A÷W e′ d

酶活定義：每 104 個細胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。

FDH 酶活（nmol/min/104cell）=數量

（4） 按液體體積計算

DA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數量（萬個））÷T= 643×△A÷細胞 e′ d

酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。

FDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反總÷V 樣÷T=643×△A e′ d

e：NADH 微摩爾消光系數，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 反總：反應體系總體積， 0.2ml；V 樣：反應體系中樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T，反應時間，5min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g