| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BK6005 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 琥珀酸脫氫酶試劑盒 |
琥珀酸脫氫酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH 是線粒體的一種標志酶，位于線粒體內膜上的一種膜結合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細胞產能的呼吸鏈提供電子。
測定原理：
SDH 催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原 2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在 600nm 處具有特征吸收峰，通過 600nm 吸光度的變化，測定 2．6-DPIP 的還原速度，代表SDH 酶活性。
琥珀酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環系列
組成：
產品名稱 | BK6005-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 100ml | -20℃ |
試劑二：液體 | 20ml | -20℃ |
試劑三：液體 | 1.5ml | -20℃ |
試劑四：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑五：粉劑 | 1 支 | -20℃ |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿 600g，4℃離心 5min。
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的 SDH（此步可選做）。
5、 在步驟④的沉淀中加入 200μl 試劑二和 2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次），用于線粒體 SDH 活性測定。
測定步驟和加樣表：
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 600nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1） 在試劑四中加入 18ml 蒸餾水充分溶解，置于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（2） 在試劑五中加入 1ml 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（3） 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 樣本、10μl 試劑五和 180μl 試劑四，混勻，立即記錄 600nm處 20s 時的吸光值A1 和 1min20s 后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
SDH 活性的計算：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T=952×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=192×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.385×ΔA
V 反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；
V 樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=384×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.77×ΔA
V 反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數，2.1×104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間，1 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。
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