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cKO小鼠動(dòng)物模型
- 公司名稱(chēng) 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)廠(chǎng)家
- 更新時(shí)間 2025/6/26 18:27:41
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制作動(dòng)物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測(cè) 病理學(xué)形態(tài)檢測(cè) 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè) 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等
一、cKO小鼠模型的核心定義與技術(shù)原理
1. 基本概念
cKO小鼠是通過(guò)時(shí)空特異性基因敲除技術(shù)，在特定組織、細(xì)胞類(lèi)型或發(fā)育階段選擇性失活目標(biāo)基因的模型。其核心在于克服傳統(tǒng)KO（全身性敲除）的胚胎致死問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)基因功能的精準(zhǔn)解析。
2. 分子機(jī)制：Cre-loxP系統(tǒng)
| 組件 | 功能 | 技術(shù)演進(jìn) |
|---|---|---|
| loxP位點(diǎn) | 34bp回文序列，被Cre重組酶識(shí)別 | 通過(guò)同源重組或CRISPR插入目標(biāo)基因兩側(cè) |
| Cre重組酶 | 介導(dǎo)loxP間DNA片段切除或反轉(zhuǎn) | 組織特異性啟動(dòng)子（如Alb-肝臟、Nes-神經(jīng)元）控制表達(dá) |
| 誘導(dǎo)型系統(tǒng) | 化學(xué)/光控激活Cre（如Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2） | 實(shí)現(xiàn)時(shí)間可控敲除（Hayashi & McMahon, 2002） |
關(guān)鍵流程：
構(gòu)建flox小鼠（Flanked by loxP）：目標(biāo)基因關(guān)鍵外顯子兩側(cè)插入loxP位點(diǎn)，未激活時(shí)基因功能正常。
與Cre工具鼠雜交：Cre在特定組織表達(dá)后切除floxed基因片段，實(shí)現(xiàn)條件性敲除。
二、cKO模型構(gòu)建的技術(shù)突破與挑戰(zhàn)
1. 技術(shù)瓶頸與解決方案
| 挑戰(zhàn) | 傳統(tǒng)限制 | 前沿突破 |
|---|---|---|
| 長(zhǎng)片段敲除效率低 | 片段>5kb時(shí)陽(yáng)性率驟降 | 藥康生物長(zhǎng)片段技術(shù)（支持23Mb片段編輯） |
| Cre表達(dá)滲漏 | 非特異性重組致背景敲除 | Tet-On/Cre-ERT2系統(tǒng)精準(zhǔn)誘導(dǎo) |
| 多基因協(xié)同調(diào)控難 | 單一基因操作局限 | CRISPR-Cas12a聯(lián)用實(shí)現(xiàn)多基因條件敲除 |
2.
三、cKO vs. KO：核心差異與適用場(chǎng)景
1. 功能對(duì)比
| 特性 | 傳統(tǒng)KO小鼠 | cKO小鼠 |
|---|---|---|
| 基因缺失范圍 | 全身性 | 組織/時(shí)間特異性 |
| 胚胎致死規(guī)避 | 不可 | 可（如胚胎必需基因） |
| 研究焦點(diǎn) | 基因全局功能 | 時(shí)空特異性機(jī)制（如遲發(fā)性病理） |
| 應(yīng)用案例 | Lep-KO（肥胖模型） | 神經(jīng)元特異性Tau敲除（阿爾茨海默病） |
2. 選擇指南
四、cKO模型的三大應(yīng)用場(chǎng)景
1. 胚胎致死基因研究
案例：DNA聚合酶β（Polβ）全身KO致胚胎死亡，但T細(xì)胞特異性cKO揭示其在免疫應(yīng)答中的功能（Gu et al., 1994）。
2. 組織特異性機(jī)制解析
神經(jīng)科學(xué)：多巴胺受體Drd2在神經(jīng)元cKO后，揭示其調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞激活的途徑。
腫瘤免疫：PD-1在T細(xì)胞中條件敲除，驗(yàn)證免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的細(xì)胞特異性毒性。
3. 時(shí)序性病理模擬
誘導(dǎo)型系統(tǒng)：Tamoxifen激活Cre-ERT2，在成年小鼠中敲除Alzheimer相關(guān)基因App，模擬遲發(fā)性神經(jīng)退行。
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