cas：149838-22-2，FM 1-43是一種廣泛應用于神經科學和細胞生物學研究的熒光探針，其核心特性、應用場景及操作要點如下：

化學本質與基本性質

• 化學名稱：N-(3-三乙基銨丙基)-4-(4-(二丁基氨基)苯乙烯基)吡啶二溴鹽

• 分子量：611.54 g/mol

• CAS號：149838-22-2

• 外觀：橙色至紅色固體

結構式：

• 溶解性：

• 水溶性：可溶于水，但需注意吸濕性（建議使用新開封的DMSO助溶）。

• 有機溶劑：易溶于DMSO（溶解度可達50 mg/mL，需超聲助溶并控制溫度<60℃）。

• 儲存條件：

• 短期：4℃密封避光保存（避免反復凍融）。

• 長期：-80℃保存（6個月內使用），-20℃保存（1個月內使用）。

熒光特性

• 激發/發射波長：

• 溶劑中：Ex 480 nm，Em 626-636 nm（橙紅色熒光）。

• 膜結合后：Em 565-590 nm（黃色熒光，Stokes位移大，需長通發射濾光片）。

• 熒光行為：

• 水溶液中幾乎不發光，插入細胞膜后熒光顯著增強。

• 膜結合后熒光光譜藍移，便于與背景信號區分。

核心應用場景

1. 神經科學研究：

• 突觸囊泡循環：標記主動釋放神經遞質的神經元，通過內化進入可回收突觸囊泡，實現神經末梢高亮度染色。

• 機械轉導通道研究：作為毛細胞機械傳遞通道的滲透阻滯劑，用于耳毒性機制研究（如降低氨基糖苷類抗生素的耳毒性）。

• 活性依賴性機制：結合KCl刺激法，動態追蹤突觸小泡的釋放與回收。

2. 細胞生物學研究：

• 細胞膜通透性檢測：通過熒光強度反映細胞膜的通透性和流動性。

• 膜電位研究：敏感反映細胞膜電位變化，用于檢測神經細胞興奮性和離子通道功能。

3. 成像技術兼容性：

• 適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、微孔板讀數儀等設備。

實驗操作要點

1. 工作液配制：

• 儲備液：用DMSO配制5 mM儲備液（需超聲助溶）。

• 工作液：用預熱HBSS溶液稀釋至5-20 μM（現用現配）。

2. 細胞標記流程：

• 懸浮細胞：

• 貼壁細胞：

1. 培養于無菌蓋玻片上，移除培養基后加入100 μL染料工作液。

2. 孵育5-30分鐘后，用培養基洗滌2-3次，成像觀察。

3. 離心收集細胞，PBS洗滌兩次。

4. 加入1 mL FM 1-43工作液，室溫孵育5-30分鐘。

5. 離心棄上清，PBS洗滌兩次后重懸，用于成像。

3. 非特異性染色去除：

• 標記后通過洗滌（如PBS或培養基）輕松去除細胞表面非特異性結合的染料。

4. 固定樣本處理：

• 若需固定樣本，選擇FM 1-43FX（醛類固定劑兼容版本），避免普通FM 1-43在固定過程中丟失信號。

注意事項

• 毒性：對細胞無毒，但需避免反復凍融導致降解。

• 避光操作：熒光探針對光敏感，所有步驟需在避光條件下進行。

• 設備兼容性：使用典型熒光素（如FITC）或GFP光學濾光片組，但需注意其發射光譜與四甲基羅丹明（TRITC）濾光片不兼容。

cas：149838-22-2，FM 1-43

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