Bio-Rad伯樂T100擴增儀pcr儀

?樣本容量?：支持96個0.2 ml試管、0.2 ml八聯管或1個96孔板?。

?溫度范圍?：4-100°C?。

?溫度精度?：±0.5°C設定溫度?。

?升降溫速率?：最大升降溫速率為4°C/sec，平均升降溫速率為2.5°C/sec?。

?溫度均勻性?：±0.5°C（孔間溫度差），在30秒內達到目標溫度?。

?梯度范圍?：30-100°C，溫度差異范圍為1-25°C?。

?顯示屏?：5.7英寸VGA彩色觸摸屏?。

?內存?：500個典型程序，USB閃存驅動器可無限擴展?。

?尺寸和重量?：尺寸為26 x 47 x 23 cm，重量為9 kg?。

Bio-Rad伯樂T100擴增儀pcr儀

伯樂 T100 PCR 儀標準操作流程 (SOP)

準備工作:

開啟儀器電源： 按下儀器背面的電源開關 (通常位于左下角或右下角)。

儀器自檢與預熱： 儀器啟動后會進行自檢，完成后主屏幕會顯示系統信息、當前模塊溫度和狀態 (通常顯示“Idle”或“Standby”)。儀器可能需要幾分鐘達到設定的待機溫度 (通常是 4°C 或 10°C)。

準備 PCR 反應體系:

在冰上或冷板上，按照你的實驗方案 (Protocol) 在 PCR 管或 PCR 板中配制好所有反應混合液。

蓋緊蓋子： 確保所有反應管的蓋子或 PCR 板的封膜都蓋緊、密封 ，防止加熱過程中蒸發或污染。

短暫離心 (可選但推薦)： 將配好的反應管/板短暫離心 (例如 5-10 秒)，使液體沉到管底/孔底，并去除管壁/孔壁的氣泡。

放置樣品:

打開熱蓋： 按下儀器正面右上角的 “Lid” 按鈕抬起熱蓋。熱蓋會升起。

放置樣品架 (樣本塊適配器)：

如果使用的是單管或排管，通常是將它們直接放入樣本塊 (Sample Block) 的孔中。

如果使用的是 96 孔 PCR 板，需要先將 銀色的金屬樣品架 (Sample Block Adapter) 小心地放入樣本塊中。注意方向： 樣品架有定位銷，確保它卡入樣本塊的定位孔中，放置平穩。

將蓋好蓋子的 PCR 管或密封好的 PCR 板小心地放入樣品架/樣本塊中。確保放置平穩。

關閉熱蓋： 輕輕按下熱蓋中央，直到聽到輕微的“咔嗒”聲或感覺到它自動吸合鎖緊。務必確保熱蓋關閉且夾緊！ 屏幕狀態會顯示 “Lid Closed”。

創建或選擇程序 (Protocol):

在主屏幕上，使用導航旋鈕 (中央的大旋鈕) 選擇 “Protocol” 菜單，按旋鈕確認。

新建程序：

選擇 “New” 。

輸入程序名稱： 使用旋鈕選擇字母和數字，輸入一個容易識別的名稱 (如 “MyGene_PCR”)，按旋鈕確認。

添加步驟： 選擇 “Add Step” 或 “Insert Step” 。

設定步驟參數：

Temp: 使用旋鈕輸入溫度值 (℃)。

Time: 使用旋鈕輸入該溫度的持續時間 (格式通常是 分:秒，如 1:30 表示 1分30秒)。

Repeat: 設置該步驟的重復次數 (通常對于單個變性/退火/延伸步驟設為1)。

Goto: 設置該步驟完成后跳轉到的步驟號 (用于循環)。

Increment: (高級功能，梯度PCR時用) 設置溫度遞增/減量。默認關。

Auto: (高級功能) 設置該步驟是否使用預設的快速升溫/降溫速率。通常保持默認。

按旋鈕確認該步驟設置。

重復添加步驟： 根據你的 PCR 程序，依次添加所有步驟：

初始變性 (Initial Denaturation)： 如 95°C， 5 min。

循環主體 (Cycling)： 通常包括：

變性 (Denaturation)： 如 95°C， 30 sec。

退火 (Annealing)： 如 55-60°C， 30 sec (具體溫度根據引物Tm值優化)。

延伸 (Extension)： 如 72°C， 1 min/kb (根據產物長度設定)。

設置循環次數： 在循環主體的第一個步驟 (通常是變性步驟) 中，將 Repeat 設置為 0 ，并在 Goto 中設置為循環體末尾的步驟號 (通常是延伸步驟)。然后在循環體最后一個步驟 的 Goto 中設置跳轉到循環體的第一個步驟 。同時在某個步驟設置 Repeat 為你需要的總循環次數 (如 30x)。(更直觀的方式是添加一個“Cycle”步驟來設置循環次數，但T100基礎操作通常是按上述設置跳轉)。

終延伸 (Final Extension)： 如 72°C， 5-10 min。

保溫 (Hold)： 如 4°C 或 10°C 。

設定熱蓋溫度: 在主程序編輯界面或專門的設置菜單中，找到 Lid Temp 選項。強烈建議將熱蓋溫度設置為比反應體系中最高溫度高 5-10°C (例如，如果最高變性溫度是95°C，建議設Lid Temp為105°C)。這是防止管內液體在管蓋頂部冷凝的關鍵！按旋鈕確認。

保存程序： 完成所有步驟設置后，選擇 “Save” (通常按 “Save” 軟鍵 F1-F5 中的一個)。輸入的名稱會出現在程序列表中。

選擇現有程序： 如果在 “Protocol” 菜單中已有保存好的程序，使用旋鈕滾動選擇所需程序名稱，按旋鈕確認加載。

運行前確認:

程序加載后，屏幕會顯示程序的詳細信息：名稱、各步驟溫度/時間、循環次數、總預計運行時間等。

再次檢查：

熱蓋是否緊閉？ (狀態顯示 Lid Closed)

樣品是否放置平穩？

程序參數是否正確？ (特別是關鍵溫度、時間、循環次數、熱蓋溫度)

按 “Start” 按鈕 (通常是一個綠色的實體按鈕或屏幕軟鍵)。

運行程序:

按下 “Start” 后，儀器會提示確認 (通常是 “Start Run?”)。選擇 “Yes” 或按 “Start” 按鈕再次確認 (取決于具體界面)。

儀器開始運行：

熱蓋會先升溫到設定溫度。

樣本塊開始按照程序設定的溫度和時間進行變化。

屏幕會實時顯示當前運行的步驟、剩余時間、當前溫度、設定溫度、總剩余時間等信息。

運行過程中，不要打開熱蓋！ 會中斷程序并可能損壞樣品。

程序結束:

當程序運行到最后的保溫步驟 (如 4°C) 并達到設定溫度時，儀器會發出提示音 (嘀嘀聲)，屏幕顯示 “Run Complete” 或類似信息，狀態變為 “Idle/Hold”。

打開熱蓋： 按下 “Lid” 按鈕抬起熱蓋。

取出樣品： 戴好防熱手套！ 樣本塊在剛結束高溫步驟后會很燙。小心取出 PCR 管或板，轉移到冰上或下一步實驗所需的地方。

關閉儀器或準備下次運行：

如果當天不再使用，可以關閉儀器電源。

如果很快要運行下一輪，可以保持儀器處于待機保溫狀態 (通常是4°C)，并蓋好熱蓋。

日常維護 (重要！):

清潔樣本塊和熱蓋： 定期 (如每周或每次污染風險后) 使用 不含棉絮的實驗室紙巾 蘸取少量 70%乙醇 或異丙醇，輕輕擦拭樣本塊表面和熱蓋底部的接觸面。切勿將液體直接倒入樣本塊孔中！ 等待干燥后再使用。

清潔儀器外殼： 用濕布和溫和清潔劑清潔外殼。避免液體流入儀器內部。

保持通風口暢通： 確保儀器周圍和背部的通風口不被堵塞。

關鍵注意事項和安全提示:

高溫燙傷： 運行過程中和剛結束時，樣本塊和熱蓋溫度較高！務必在打開熱蓋和取放樣品時佩戴隔熱手套。

蓋緊蓋子： PCR管蓋/PCR板封膜密封不良是實驗失敗（蒸發、污染）的常見原因。

設置熱蓋溫度： 這是很容易被遺忘但極其關鍵的一步！ 熱蓋溫度不足會導致冷凝水回流稀釋反應液。

程序驗證：第一次運行新程序或重要實驗前，建議用水或空白反應進行測試運行，檢查溫度升降是否正常。

污染預防： 操作時佩戴手套，使用無核酸酶槍頭和耗材。每次使用前后清潔工作區域。定期清潔儀器表面和樣本塊。

斷電安全： 如果運行過程中意外斷電，重新通電后儀器可能會嘗試恢復上次運行狀態或停在保溫步驟。請評估樣品狀態決定是否繼續使用或重新開始。

遵循實驗室 SOP： 務必嚴格遵守你所在實驗室針對 T100 PCR 儀制定的具體操作規程和安全規定。

查閱手冊： 對于高級功能 (如梯度PCR、程序鏈接、用戶自定義升溫速率等)，請參考隨機附帶的 Bio-Rad T100 Thermal Cycler Instruction Manual 。

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