如何使用SEC-HPLC進行蛋白質純度與均一性分析？檢測技術服務詳情介紹

在生物制藥及生命科學研究中，dànbáizhì的純度與均一性是關鍵質量屬性（CQA），直接影響生物制品的安全性、有效性及穩定性。尺寸排阻高效液相色譜（SEC-HPLC）以其高分辨率、溫和分離和定量能力，已成為dànbáizhì純度及聚集狀態分析的核心技術。本文將介紹SEC-HPLC的原理、操作要點、關鍵參數及數據解讀方法。

一、SEC-HPLC的原理與優勢

SEC-HPLC（Size Exclusion Chromatography-High Performance Liquid Chromatography）基于分子體積大小進行分離。色譜柱內填充多孔硅膠或高分子凝膠材料，dànbáizhì分子在流動相中通過“篩分效應”進入或排除孔隙，分離以分子體積為依據。大分子因無法進入孔隙而快速洗脫，小分子則被延遲。

主要優勢包括：

• 高分辨率與良好重現性：可區分蛋白單體、寡聚體及聚集體；

• 溫和分離條件：非變性分離，保持蛋白結構與活性；

• 定量能力突出：紫外吸收等檢測器可實現組分定量分析；

• 適用范圍廣：涵蓋單克隆抗體、疫苗、重組蛋白、酶等多種生物制品。

二、樣品制備與系統優化

1、樣品準備

為確保柱效和數據準確性，樣品需嚴格預處理：

• 使用0.22 µm過濾器去除顆粒雜質，避免堵塞柱床；

• 緩沖液與流動相匹配，保持蛋白穩定性，避免因緩沖液不同引起基線漂移或峰變形；

• 控制樣品濃度，過高可能導致柱過載和峰展寬，過低則信號不足。

2、色譜柱與流動相

選擇合適孔徑（如300 ?或更高）和粒徑（3–5 µm）的SEC色譜柱，確保分離dànbáizhì單體與聚集體。流動相多采用生理鹽濃度（如150 mM NaCl）和中性緩沖液（如磷酸鹽緩沖液），以減少非特異吸附并保持蛋白構象。優化流速（一般0.2–0.5 mL/min）以兼顧分辨率與分析時間。

3、系統驗證

SEC-HPLC分析前應進行系統適用性驗證，包括：

• 柱效（理論塔板數）；

• 保留時間重現性（RSD<1%）；

• 峰面積線性范圍；

• 分子量校準曲線的準確性（不涉及具體標準物質品牌）。

三、檢測與數據分析

常用檢測器為紫外檢測器（UV），檢測波長一般為280 nm，適合dànbáizhì芳香族殘基吸收特性。對于復雜樣品，可引入多角度光散射（MALS）和示差折光（RI）檢測，獲取分子量分布與濃度信息。

數據解讀關鍵指標包括：

• 純度評估：主峰面積占總峰面積的百分比，反映蛋白純度；

• 均一性分析：考察單體峰對稱性、半峰寬（FWHM）、保留時間是否穩定；

• 聚集體檢測：早洗脫峰（大體積）指示高分子聚集體含量；

• 降解產物識別：晚洗脫峰（小體積）可能指示低分子降解產物；

• 分子量確認：利用分子量校準曲線，推算各組分分子量，結合MALS檢測結果驗證均一性。

四、SEC-HPLC在生物制藥中的應用價值

SEC-HPLC在生物藥物開發的多個環節扮演關鍵角色：

• 藥物研發：監測重組蛋白、單抗制備過程中的純度和聚集體含量；

• 工藝開發：優化上游表達與下游純化工藝，確保zuì終產品的質量；

• 質量控制：作為放行與穩定性檢測的重要手段，評估批間一致性與長期穩定性；

• 法規符合性：符合ICH Q6B等國際質量規范要求，支持注冊申報資料。

SEC-HPLC因其溫和、高分辨率及定量能力，已成為dànbáizhì純度與均一性分析的核心技術。通過合理的樣品準備、系統優化及數據解讀，可全面評估dànbáizhì量屬性，識別聚集體及降解產物，確保產品安全與有效性。百泰派克生物科技依托優良的SEC-HPLC平臺與經驗豐富的分析團隊，提供從方法開發、系統驗證到樣品分析的一站式解決方案。我們的服務涵蓋多種生物藥及復雜蛋白產品，確保結果具有高分辨率、良好重現性及可比性，滿足從研發到生產質控的多層次需求。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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