價格 | 詢價 |
---|
HPLC如何檢測蛋白質純度?原理與操作流程全解析檢測技術服務詳情介紹
dànbáizhì純度是影響下游實驗可靠性和產品質量的核心指標。高效液相色譜(High-Performance Liquid Chromatography, HPLC)以其zhuóyuè的分離能力和定量精度,成為蛋白純度檢測的重要手段。本文將解析HPLC檢測dànbáizhì純度的原理、操作流程及優化策略。
一、HPLC檢測dànbáizhì純度的原理
HPLC利用固定相與流動相間的相互作用差異,將樣品中不同組分分離,進而定量分析目標蛋白的純度。根據蛋白的理化特性,常用HPLC方法包括:
1、尺寸排阻色譜(SEC)
原理:通過多孔填料對dànbáizhì分子的排阻作用實現分離。分子量較大的組分先洗脫,較小組分后洗脫。
應用:適用于檢測蛋白聚集體、降解產物等高分子雜質。
2、反相色譜(RP-HPLC)
原理:依賴蛋白疏水性與固定相(如C18柱)間的疏水作用力分離。疏水性較強的組分與固定相結合更緊密,延遲洗脫。
應用:用于分析蛋白純度、結構完整性,特別對疏水區結構變化敏感。
3、離子交換色譜(IEX)
原理:基于蛋白表面電荷與帶相反電荷的固定相(陽離子或陰離子交換劑)間的靜電相互作用實現分離。通過調節流動相中鹽濃度或pH梯度,分離不同電荷異構體。
應用:適合檢測蛋白的電荷異質性及雜質含量。
二、dànbáizhì純度HPLC檢測的標準操作流程
1、樣品準備
將蛋白樣品溶解于適當緩沖液(如PBS),確保wánquán溶解。
采用0.22 μm過濾器除去微粒,防止堵塞色譜柱。
控制進樣濃度在系統建議范圍(通常為0.1–5 mg/mL),避免柱過載。
2、色譜系統準備與條件設定
根據目標蛋白選擇合適的色譜柱(SEC、RP、IEX)。
配制并過濾流動相,確保與樣品及柱兼容,防止析出物堵塞系統。
設定流速、柱溫(通常為25–40℃)及檢測波長(常用280 nm)。
3、系統平衡與樣品進樣
使用流動相平衡色譜系統(約10–30分鐘),確?;€穩定。
采用自動進樣或手動進樣,注意進樣體積的jīngzhǔn控制。
4、洗脫及檢測
SEC通常采用等度洗脫,保持流動相組成恒定。
RP-HPLC和IEX多采用線性或階梯梯度洗脫,提高分辨率。
通過紫外檢測器(UV)監控洗脫峰,繪制色譜圖。
5、數據分析與純度計算
提取色譜圖中主峰(目標蛋白)及雜質峰面積,計算純度百分比。通用公式:純度(%) = (主峰面積 ÷ 所有峰面積總和) × 100
為確保結果準確可靠,建議進行多次進樣,并結合自動積分與峰識別功能分析。
三、提高檢測準確性的關鍵要點
合理選擇色譜柱:依據蛋白的分子量、疏水性或電荷特性,選擇匹配的分離模式。
優化流動相組成:保證流動相的pH、鹽濃度與蛋白穩定性相容,減少樣品降解或非特異性結合。
系統維護與柱保護:定期清洗流路和色譜柱,避免殘留物污染影響分析結果。
梯度洗脫策略:對于復雜樣品,可通過優化梯度條件實現更高分辨率分離。
定量結果驗證:通過多次獨立進樣、使用外標或內標法驗證數據穩定性與準確度。
HPLC以其高分辨率、良好重復性和高靈敏度,已成為dànbáizhì純度檢測bùkěhuòquē的核心技術。深入理解其原理與操作流程,合理選擇色譜模式并優化參數,是確保實驗成功的關鍵。百泰派克生物科技憑借優良的色譜分析平臺和經驗豐富的技術團隊,能夠提供從方法開發、系統搭建到數據解析的一體化解決方案。我們結合高分辨率分離技術與嚴格質量控制體系,為科研人員與企業客戶提供高質量、可重復、數據可追溯的蛋白純度檢測服務。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!