單細胞蛋白組如何高通量定量？TMT標記全攻略檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

細胞是生命活動的基本單元，然而即使同源細胞在相同環(huán)境中也可能呈現(xiàn)出顯著的功能差異。這種細胞間異質(zhì)性在癌癥、免疫、發(fā)育等研究中被認為具有重要生物學意義。單細胞RNA測序近年來發(fā)展迅速，TMT標記（Tandem Mass Tag）成為單細胞dànbáizhì組定量中廣泛采用的核心策略，憑借其高通量、多通道定量能力，為單細胞蛋白組分析打開新局面。

一、什么是TMT標記？

TMT是同位素編碼的化學標簽，能夠與肽段上的氨基反應(yīng)，實現(xiàn)多樣本的混合檢測。每一個TMT標簽由質(zhì)量報告離子部分組成，在質(zhì)譜中經(jīng)過高能碎裂后釋放出不同的報告離子，從而對各樣本來源的肽段進行定量。這種“共混檢測、分離定量”的策略極大提升了質(zhì)譜的通量與比較能力，尤其適用于樣本量極低、需要并行分析多個單元的研究場景。在單細胞蛋白組中，研究人員通常將多個單細胞樣本與一個高量“載體通道”（carrier channel）共同標記，利用載體中的高信號增強MS1的檢測效率，再通過MS2或MS3的碎裂譜圖讀取各通道的報告離子強度，實現(xiàn)jīngquè定量。

二、單細胞TMT定量的核心流程解析

1、單細胞分離與裂解

單細胞蛋白組分析的dìyī步是從組織或細胞群中分離單個細胞。常見方法包括流式分選（FACS）、微流控芯片、自動化移液系統(tǒng)等。分離后的細胞立即裂解，防止蛋白降解或修飾狀態(tài)變化。由于dànbáizhì濃度極低，裂解緩沖液需兼顧高效性與兼容性，盡可能減少蛋白吸附與樣品損失。同時使用低結(jié)合耗材、微量試劑、控制裂解反應(yīng)時間等細節(jié)也對數(shù)據(jù)質(zhì)量至關(guān)重要。

2、蛋白酶解與TMT標記

裂解后的dànbáizhì需在微量體系下完成還原、烷基化和酶解步驟。為提高效率，研究者常采用微量優(yōu)化版yídànbáiméi，并縮短反應(yīng)時間以防止非特異降解。酶解完成后，肽段與TMT標簽反應(yīng)。不同單細胞樣本用不同TMT標簽標記，隨后在等比例條件下混合，加入載體通道，形成zuì終的TMT混合樣品。這個混合過程要求jígāo的準確性，比例失衡可能造成定量誤差，甚至引入系統(tǒng)性偏倚。

3、肽段純化與質(zhì)譜檢測

標記完成的樣品需進行純化去除多余試劑，常用SP3磁珠或StageTip固相提取方法。由于單細胞肽段量極少，每一步操作都需謹慎控制，避免肽段丟失。質(zhì)譜分析階段，通常采用高靈敏、高分辨的儀器平臺如Orbitrap系列，通過數(shù)據(jù)依賴采集（DDA）模式進行肽段識別和報告離子定量。為進一步提升定量精度，常結(jié)合SPS-MS3技術(shù)，有效降低同位素干擾與共碎裂誤差。

4、數(shù)據(jù)處理與定量分析

TMT數(shù)據(jù)的分析流程包括原始譜圖解碼、肽段鑒定、報告離子提取、信號歸一化和統(tǒng)計分析。對于單細胞數(shù)據(jù)，還需特別處理載體通道干擾、缺失值*與批次效應(yīng)校正。在結(jié)果解讀階段，可進一步結(jié)合功能富集分析、聚類算法、差異表達分析等方法，揭示細胞狀態(tài)分布、功能通路激活及蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從而還原單細胞dànbáizhì層面的生物圖譜。

三、TMT在單細胞蛋白組中的優(yōu)勢

TMT標記技術(shù)為單細胞蛋白組提供了可能的解決方案，其主要優(yōu)勢包括：

• 可在單次實驗中并行分析10-18個樣本，顯著提高數(shù)據(jù)通量；

• 混合測量減少批次變異，有利于跨樣本定量比較；

• 搭配gāoduān質(zhì)譜平臺，可檢測千級別以上的蛋白種類。

TMT標記技術(shù)為單細胞dànbáizhì組學的高通量定量提供了堅實的工具基礎(chǔ)。它不僅有效提升了微量樣本的檢測能力，也兼顧了數(shù)據(jù)一致性與通量需求，為探索細胞異質(zhì)性、疾病機制與藥物反應(yīng)提供了jígāo的分辨率。隨著質(zhì)譜技術(shù)的演進與樣品處理流程的標準化，TMT在單細胞蛋白組領(lǐng)域的應(yīng)用正不斷擴展，其潛力遠不止于科研探索，更有望推動jīngzhǔn醫(yī)療、生物標志物開發(fā)等臨床轉(zhuǎn)化路徑。百泰派克生物科技持續(xù)關(guān)注前沿蛋白組技術(shù)發(fā)展，致力于打造高質(zhì)量的單細胞蛋白組分析解決方案，助力科研工作者從微尺度揭示生命的本質(zhì)。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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