Postnova場流分離系統應用舉例——蛋白質聚集體分離的理想解決方案

時間：2010-11-1閱讀：866

Postnova場流分離系統應用舉例——蛋白質聚集體分離的理想解決方案

蛋白質聚集體已經成為藥學發展和質檢上一個重要的問題。其活性，生物利用度和可能的消極免疫響應等性能直接與不同程度的聚集態的存在有關。因此不僅FDA, 更多的*和私人研究機構都對聚集態結構產生越來越大的興趣。他們研究的目標是確定的聚集情況，即藥物中的蛋白質中某個時間有多少聚集態結構形成以及如何避免這種情況。

場流分離技術是分離技術的一種，它可以與液相色譜（LC）相比。就像液相主要用來分離小分子一樣，場流分離主要用來分離大分子或粒子（可稱為：粒子色譜）。場流分離技術是一個*的分離技術，所有場流分離技術都使用相同的基本分離的原則，但采用不同的分離場。根據不同分離場，場流分離技術可分為流動場流分離，沉淀場流分離，熱場流分離等。

當樣品注射到場流分離通道時，分離應力作用于聚合物或粒子強迫它們向通道底層移動，通道底層就被稱為聚集壁。樣品不能透過聚集壁，所以它們再次擴散到通道中心。擴散應力被分離應力抵消，在很短的時間（一般是30～120秒）內兩種力之間就建立起一個穩定的動態平衡。大小不同的顆粒有著不同的擴散系數，所以它們在通道內由于速度梯度而被分離。注射后的粒子/聚合物由于“垂直場力”的存在，受迫向垂直于流動相流動的方向移動。小粒子由于具有較大的擴散系數將會比大粒子在通道內擴散的更深遠。結果就是，小粒子在通道內被“層流”更快的定位，并因此而被洗脫出來；而大粒子則定位較慢，后洗脫出來。

上圖是使用AF4非對稱場流分離單克隆抗體的結果。在20分鐘內，不同程度的聚集態被分開，整個分離過程由于沒有固定相存在，因此蛋白質的空間結構不會被破壞。樣品不需要前處理，更可以通過聯用多種在線檢測器（LS, UV, RI, SEM, DLS），方便迅速得到需要的數據。

場流分離技術具有以下優點：

• 快速、溫和的分離，可以兼容任何溶劑和緩沖液

• 超高的分辨率（±1nm）

• 沒有任何固定相的分離通道

• 寬分離范圍：粒徑1nm~100mm /分子量1000Da~10¹²Da

• 無需前處理及過濾，直接進樣復雜基質樣品

• 可收集所需要的樣品，方便升級至制備級

• 能夠連接各種檢測器，如在線串聯紫外、光散射、熒光、質譜等檢測器

• 可同時測定分子的分子量及粒子的粒徑。

這些優點使場流分離技術在蛋白質及其聚集體分離方面可以發揮巨大的作用。

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