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電泳儀的作原理和使用方法

時間:2018/1/22閱讀:6334
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電泳儀于1937年研發(fā),常用支持物體有濾紙、醋酸纖維薄膜等。電泳是分子生物學(xué)研究*的重要分析手段。電泳般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。

儀器原理

區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學(xué)域中zui常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳,是帶電粒子在電場中的運(yùn)動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運(yùn)動速度不同,根據(jù)這征,應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)行定性或定量分析,或?qū)⒍ɑ旌衔镄薪M份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂衅渲匾囊饬x。電泳儀正是基于上述原理制的。

使用方法

1.用導(dǎo)線將電泳槽的兩個電與電泳儀的直輸出端聯(lián)接,注意性不要接反。

2.電泳儀電源開關(guān)調(diào)至關(guān)的位置,電壓旋鈕轉(zhuǎn)到zui小,根據(jù)作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)方式及電壓電范圍。

3.接通電源,緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止,設(shè)定電泳終止時間,此時電泳即開始行。

4.作畢后,應(yīng)將各旋鈕、開關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài),并撥出電泳插頭。

注意事項

 

1.電泳儀通電入作狀態(tài)后,禁止人體接觸電、電泳物及其它可能帶電分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,如需要應(yīng)斷電,以免觸電。同時要求儀器有良好接地端,以防漏電。

2.儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然儀器內(nèi)附設(shè)有保險絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。

3.由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電量也不同,其泳動速度及泳至終點(diǎn)所需時間也不同,故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同電泳儀上行。

4.在總電不過儀器額定電時(zui大電范圍),可以多槽關(guān)聯(lián)使用,但要注意不能載,否則容易影響儀器壽命。

5.某些殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機(jī),但在穩(wěn)狀態(tài)下接好負(fù)載再開機(jī),否則電壓表針將大幅度跳動,容易成不的人為機(jī)器損壞。

6.使用過程中發(fā)現(xiàn)異?,F(xiàn)象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,行檢修,以免發(fā)生意外事故。

研發(fā)背景

1937年,瑞典生化學(xué)家Tiselius集前人百余年探索電泳現(xiàn)象之大成,了Tiselius電泳儀,在此基礎(chǔ)上建立了研究蛋白質(zhì)的自由界面電泳方法,利用該法證明人血清是由白蛋白(A)、α、β、γ蛋白組成,并因此于1948年獲得阿果獎。隨后電泳的發(fā)展突飛猛,1949年,RicketlsMarrack等人證明人血清蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離可依次分為白蛋白,α1、α2、β、γ蛋白五個組分,1957年Reiner對人血清五個組分蛋白行了定量分析。

但自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),擴(kuò)散和對作用較強(qiáng),影響分離效果,于是在50年代相繼出現(xiàn)了固相支持介質(zhì)電泳。zui初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實驗室已經(jīng)應(yīng)用較少。在很長段時間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙、纖維素或硅膠薄層平板作為介質(zhì)行電泳分離、分析,但目前般使用靈敏度更的如液相色譜法(HPLC)等來行分析。而對于復(fù)雜的生物大分子,以濾紙、硅膠或醋酸纖維素膜等作為支持介質(zhì)行電泳,其分離效果并不理想。于是1959年,Raymond和Weintraub,Davis和Ornstein后利用人合成凝膠作支持介質(zhì)建立了聚丙烯酰胺凝膠電泳,從而大大提了電泳的分辨率和分離效果,增強(qiáng)了電泳的發(fā)展、滲透及與其他結(jié)合配套的能力。致使各式各樣的電泳和電泳材料如雨后春筍、競相爭榮,成為當(dāng)代實驗中品種繁多、應(yīng)用廣泛、基礎(chǔ)與皆備的大。

根據(jù)電泳中是否使用支持介質(zhì)分為自由電泳和區(qū)帶電泳。

自由電泳不使用支持介質(zhì),電泳在溶液中行。這類電泳又分為非自由界面電泳和自由界面電泳兩類。非自由界面電泳懸浮在溶液中的帶電粒子(如各種細(xì)胞)通電后移動,不出現(xiàn)界面,如顯微電泳等。自由界面電泳中被分離物質(zhì)集中在某層,形成各自的界面而行定性或定量分析。自由界面電泳需要昂貴的電儀器,僅在少數(shù)殊電泳如等電聚焦電泳和等速電泳中使用。

區(qū)帶電泳都使用支持介質(zhì),根據(jù)支持介質(zhì)不同分為濾紙電泳、醋纖膜電泳、薄層電泳和凝膠電泳等。此外,根據(jù)支持介質(zhì)的裝置形式不同又可分為水平板式電泳、垂直板式電泳、垂直盤狀電泳、毛細(xì)管電脈、橋形電泳和連續(xù)動電泳等。

儀器原理

區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學(xué)域中zui常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳,是帶電粒子在電場中的運(yùn)動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運(yùn)動速度不同,根據(jù)這征,應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)行定性或定量分析,或?qū)⒍ɑ旌衔镄薪M份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂衅渲匾囊饬x。電泳儀正是基于上述原理制的。

 

儀器原理

區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學(xué)域中zui常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳,是帶電粒子在電場中的運(yùn)動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運(yùn)動速度不同,根據(jù)這征,應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)行定性或定量分析,或?qū)⒍ɑ旌衔镄薪M份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂衅渲匾囊饬x。電泳儀正是基于上述原理制的。

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