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細(xì)胞核的分離提取
點(diǎn)擊次數(shù)：3628 發(fā)布時(shí)間：2017-1-5
細(xì)胞核的分離提取
（一）操作步驟
1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開(kāi)腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結(jié)締組織）盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。
2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。
3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3～5次，用3層紗布過(guò)濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標(biāo)記，自然干燥。
4．將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機(jī)，以2500rpm，離心15分鐘；（1）緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用；（2）同時(shí)涂一張上清液片②做好標(biāo)記，自然干燥；（3）余下的沉淀物進(jìn)行下一步驟。
5．用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500rpm離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。
6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。
（二）結(jié)果
分別于高倍鏡下觀察三張涂片，描述鏡下所見(jiàn)。
三、高速離心分離提取線粒體
（一）操作步驟
1．將裝有上清液的高速離心管，從裝有冰塊的燒杯中取出，配平后，以17000rpm離心20分鐘，棄上清，留取沉淀物。
2．加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化鈣液lml，用吸管吹打成懸液，以17000rpm離心20分鐘，將上清吸入另一試管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液混勻成懸液（可用牙簽）。
3．取上清液和沉淀物懸液，分別滴一滴于干凈載玻片上（分別標(biāo)記④、⑤涂片），各滴一滴0.02％詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘。
（二）結(jié)果
油鏡下觀察，顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍(lán)綠色。