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緩沖葡萄糖蛋白胨水：

用途：

用于MR和VP試驗（GB/T4789.38－2008，SN0169-92和《中華人民共和國藥典》2005年版）。

原理：

多胨提供碳氮源、維生素和生長因子；葡萄糖為可發(fā)酵的糖類；磷酸氫二鉀是緩沖劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓。

甲基紅（MR）試驗：腸桿菌科的細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再被分解，生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸。大腸桿菌分解丙酮酸，次生的酸類較多，pH為4.5或更低，甲基紅呈現(xiàn)紅色（陽性）。在產(chǎn)氣桿菌的培養(yǎng)液中一部分丙酮酸變?yōu)橹行缘囊阴＜谆状?，生成的酸類較少，pH在5.4以上，甲基紅呈現(xiàn)桔黃色（陰性）。

乙酰甲基甲醇生成試驗（V—P試驗）：細菌發(fā)酵葡萄糖生成丙酮酸，某些細菌可使丙酮酸脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性溶液中，乙酰甲基甲醇可在空氣中氧化成二乙酰（丁二酮）。二乙酰再與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。試驗中加入α—萘酚是作催化劑，使反應的顏色加深，提高反應的敏感性。

配方（每升）：

磷酸氫二鉀	5g
多胨	7g
葡萄糖	5g

zui終pH 7.0±0.2

使用方法：

1、稱取本品17g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝試管每管1mL，121℃高壓滅菌15min。

2、甲基紅（MR）試驗

A：取少量待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2—5d，哈夫尼亞菌則應在22—25℃培養(yǎng)。

B：48h取出部分培養(yǎng)液，滴加（029040）甲基紅試劑三滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽性，黃色為陰性。

3、 V—P試驗

A：取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2—4d，哈夫尼亞菌則應在22—25℃培養(yǎng)。

B：48h后取出部分培養(yǎng)液，按順序加入1/2培養(yǎng)液體積的（029050）VP試劑甲液和1/5體積的乙液充分搖勻試管，觀察結(jié)果。陽性者應立刻或數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應放在36±1℃下培養(yǎng)4h后再進行觀察。

質(zhì)量控制：

本品接種后于36±1℃培養(yǎng)48h，滴加試劑，生化特征如下：

菌名	菌號	生長狀況	MR試驗培養(yǎng)特征	VP試驗培養(yǎng)特征
大腸埃希氏菌	ATCC25922	良好	培養(yǎng)基變紅色	無紅色
產(chǎn)氣腸桿菌	CMCC（B）45301	良好	培養(yǎng)基顏色不變	10—20min內(nèi)顯紅色

參考文獻：

GB/T4789.4－2003 中華人民共和國國家標準食品衛(wèi)生微生物檢驗沙門氏菌檢驗

GB/T4789.28－2003中華人民共和國國家標準食品衛(wèi)生微生物檢驗染色法，培養(yǎng)基和試劑

SN0169－92 中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準出口食品中大腸菌群，糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法

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