Trizol法提取總RNA的流程及原理

時間：2022/10/26閱讀：1275

提取原理：
Trizol試劑的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是對細(xì)胞進(jìn)行裂解，從而使細(xì)胞當(dāng)中的蛋白質(zhì)以及核酸物質(zhì)解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質(zhì)變性，但它不能抑制RNA酶的活性，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase（即RNA酶）。

Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心，樣品能分成水樣層和有機(jī)層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后，樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。

Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細(xì)胞：5×10⁶），也可用于大量樣品（組織≥1g或細(xì)胞≥10⁷），對動物、植物、細(xì)菌、血液提取都適用，可同時處理大量不同樣品。反應(yīng)迅速，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保護(hù)分析等。

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