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Hamilton 離子排斥色譜柱在使用前要進(jìn)行活化操作
離子色譜柱是離子色譜系統(tǒng)的心臟，只有性能優(yōu)良的色譜柱才能達(dá)到良好的分離效果，這對色譜柱材料，填充料(交換樹脂)、柱尺寸、裝柱技術(shù)等均有一定的要求。柱兩端均有微孔篩板以防試料或洗脫液中的細(xì)微顆粒進(jìn)入柱中，影響柱中樹脂的滲透性。
Hamilton 離子排斥色譜柱的活化操作，以常見的C18反相分析柱為例，出廠時一般都封裝有甲醇或乙腈等有機溶劑。隨著時間的推移，色譜柱內(nèi)的有機溶劑緩慢揮發(fā)，色譜柱內(nèi)可能出現(xiàn)氣泡。因此，新購買的色譜柱在使用前一般都要進(jìn)行活化操作。
下面以常見的4.6mmX150mm,5μm粒徑的C18反相分析柱為例：
1.在活化色譜柱前，應(yīng)先用相關(guān)試劑沖洗液相系統(tǒng)的流路，確保無污染物殘留。切換至封柱試劑(一般為甲醇或乙腈)，置換流路內(nèi)的試劑。
2.停泵，將分析柱的進(jìn)液口連上系統(tǒng)，移除出液口的堵頭，出液口不連上系統(tǒng)。傾斜放置色譜柱，使其出液口高于入液口。
3.以0.1ml/min的流速沖洗色譜柱約5分鐘，切換至0.2ml/min的流速繼續(xù)沖洗。觀察色譜柱出液口，若連續(xù)出液，停泵，將色譜柱出液口接入液相系統(tǒng)。
4.以0.1ml/min的流速沖洗色譜柱，5分鐘內(nèi)將流速平穩(wěn)提升至0.5ml/min繼續(xù)沖洗色譜柱。
5.以0.5ml/min的流速沖洗色譜柱，期間觀察壓力與基線是否平穩(wěn)，直到?jīng)_洗的總流量達(dá)到30個柱體積。
6.活化完成：對于久置不用的類似型號色譜柱，再次使用前也可參考上述步驟進(jìn)行活化。