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附圖描述
的試劑盒包含nonradioactve 3'-末端標(biāo)記的寡核苷酸的試劑，所以它們可以用于在一個(gè)“凝膠遷移”測(cè)定法。它還包含控制，電泳試劑，和一種酶標(biāo)記的抗體，以促進(jìn)DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的檢測(cè)。注：重組末端轉(zhuǎn)移酶和DIG-11-ddUTP的組合使得非常靈活的標(biāo)記反應(yīng)。它可用于標(biāo)記的任何寡核苷酸的3'-末端（它是否有5'-突出端，3'突出端或平末端）。無(wú)論是單鏈和雙鏈DNA可以貼上標(biāo)簽。

樣品
量：3.85皮摩爾或100 ng  
類(lèi)型：5'-突出末端，3'-突出末端或平末端的寡核苷酸與 
單鏈或雙鏈的DNA段（30 -約200 bp）注：在理想情況下，被標(biāo)記的片段應(yīng)介于30和100個(gè)基點(diǎn)。（請(qǐng)參閱下面的更多細(xì)節(jié)“注意事項(xiàng)”）。

所需時(shí)間
退火和標(biāo)簽的寡核苷酸：10分鐘
形成的寡核苷酸-蛋白質(zhì)復(fù)合物：25分鐘
電泳：1小時(shí)至過(guò)夜，根據(jù)電泳系統(tǒng)
印跡：1 - 2小時(shí)
免疫學(xué)檢測(cè)：2小時(shí)
曝光透視膜或成象：15 - 40分鐘 

DNA-蛋白質(zhì)相互作用的研究得到了極大的便利，在近幾年的快速和簡(jiǎn)單的“凝膠阻滯”或“凝膠遷移”法。由于游離DNA和DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的凝膠電泳期間不同遷移，它們可以被分離，并上檢測(cè)到本機(jī)（非變性）的聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳。

1. 貼標(biāo)緩沖液（5倍濃度），80微升
2. 氯化鈷₂解決方案（25毫米），80微升
3. 的DIG-ddUTP解決方案（1 mM的地高辛-11-ddUTP），20微升
4. 重組末端轉(zhuǎn)移酶（400 U /μl），20μL
5. 結(jié)合緩沖液（5倍濃度），800μL
6. 控制雙鏈39mer，未標(biāo)記的寡核苷酸（0.1微克/微升，3.85皮摩爾/微升），40微升
7. 地高辛標(biāo)記的對(duì)照寡核苷酸（DS 39mer，0.4納克/微升，15.54 fmol /μL），140μL
8. 25 - 75 ng /μl的，控制因素Oct2A（），40μL 
9. 聚并[d（IC）]（0.1微克/微升），200微升
10. 聚并[d（AT）]（0.1微克/微升），加入200μl
11. 聚L-賴(lài)氨酸（0.1微克/微升雙蒸水），200微升
12. 無(wú)溴酚藍(lán)上樣緩沖液，1毫升
13. 與溴酚藍(lán)上樣緩沖液，1毫升
14. 抗地高辛-AP（750 U / ml）的40微升
15. CSPD（10毫克/毫升），440微升
16. 阻斷劑，50克

該的DIG凝膠遷移工具包使用探針，末端標(biāo)記地高辛-11-ddUTP來(lái)檢測(cè)特定序列的DNA結(jié)合蛋白。

標(biāo)記的DNA段，該片段包含感興趣的序列的培養(yǎng)的細(xì)胞提取物或純化的因子。非特異性的DNA [聚d（AT），聚d（lC的），該試劑盒中提供的]加入萃取液中，以防止形成大的非特異性蛋白-DLG-標(biāo)記的DNA復(fù)合物（這將保持在凝膠的頂部，并導(dǎo)致涂抹在凝膠電泳）。

將混合物轉(zhuǎn)移到一個(gè)本地的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。分離之后，被轉(zhuǎn)移到帶正電荷的尼龍膜的寡核苷酸 - 蛋白質(zhì)復(fù)合物，通過(guò)電泳，毛細(xì)管轉(zhuǎn)移，或印跡。

地高辛標(biāo)記的配合物，在膜上的免疫測(cè)定法中檢測(cè)到。堿性磷酸酶共軛的抗體[抗洋地黃毒苷-AP（Fab片段）]結(jié)合的地高辛標(biāo)記的oligonucleotides.The固定化堿性磷酸酶去磷酸化的化學(xué)發(fā)光底物CSPD。CSPD在去磷酸化過(guò)程中，發(fā)射光，它可以被記錄的X-射線膠片上。化學(xué)發(fā)光信號(hào)通常可以被檢測(cè)到后，膜被暴露于15 - 40分鐘的膜。（參見(jiàn)“典型的實(shí)驗(yàn)”一節(jié)）。程序的主要階段：
 

1. DIG重組末端轉(zhuǎn)移酶的3'-末端標(biāo)記的雙鏈寡核苷酸與
2. 凝膠移位反應(yīng)DIG 3'-末端標(biāo)記的寡核苷酸，其中培養(yǎng)的細(xì)胞提取物或純化的因子
3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳，使用快速電泳系統(tǒng)（Pharmacia）的
4. 寡核苷酸轉(zhuǎn)移到尼龍膜（雜交）
5. 交聯(lián) 
6. 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè) 

圖1： 地高辛標(biāo)記的寡核苷酸檢測(cè)。