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氣/質聯用法測定氯霉素CAP殘留
閱讀：1060 發布時間：2010-11-9（1）試劑和材料 以下所用的試劑，特別注明外均為分析純試劑；水為符合GB／T6682規定的二級水。
①氯霉素：含氯霉素不得少于99．o％
②丙酮：色譜純
③甲醇：色譜純
④乙酸乙酯：分析純
⑤正己烷：分析純
⑥4％氯化鈉溶液：稱取適量的氯化鈉，配制成濃度為4％的氯化鈉溶液
⑦硅烷化試劑：BSTFA+TMCS，99；l，lml／瓶
⑧氯霉素標準貯備液：稱取氯霉素約50mg，105~（2干燥4h，精密稱量，置于50ml棕色容量瓶中，加丙酮溶解并稀釋至刻度，搖勻，配置成濃度為lmg／ml的貯備液，置4℃冰箱中密封保存，有效期為3個月。
⑨氯霉素標準工作液：臨用前，準確量取適量氯霉素標準貯備液，用丙酮稀釋成適宜濃度的氯霉素標準工作液。
（2）儀器和設備
①高速組織搗碎機
②分析天平：感量0．00001g
③天平：感量0．01g
④均質器
⑤離心機
⑥氮吹儀
⑦恒溫干燥箱
⑧回旋振蕩器
⑨蝸旋式混勻器
⑩離心管：100ml
⑾具塞離心管：15ml，5ml
⑿氣相色譜儀，配質譜檢測器
（3）測定步驟
①提取和凈化 稱取5．08（iO．05g）試料，置于100ml離心管中，加入25ml乙酸乙酯，均質lmin，回旋振蕩20min，3000r／Illin離心5min。取上清液轉入另一100ml離心管中，試料中再加10ml乙酸乙酯，重復提取1次，合并上清液，氮氣（55℃）吹干。加入lml甲醇超聲溶解殘渣，依次加入25ml 4％氯化鈉和lOml正己烷，回旋振蕩20min，靜置分層，棄去正己烷層。再加入10ml正己烷，重復操作，棄去正已烷層。再加入15ml乙酸乙酯，回旋振蕩20rain，靜置分層，吸取上層轉入15ml具塞離心管中，氮氣（55℃）吹至約lml。
②衍生化 將濃縮液移人5ml具塞離心管中，用Iml乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，氮氣（55℃）蒸發至干。向殘余物中依次加入200~L正己烷，100／uL硅烷化試劑，混勻30s，于恒溫干燥箱中80~C反應1h，氮氣（55℃）吹干。加入o．50ml甲苯溶解，在渦旋式混合器上充分混勻，用氣質聯用儀選擇離子監測方式檢測。取適量的氯霉素標準工作溶液，同步衍生、檢測。
③測定
a.氣相色譜條件
色譜柱：DB—5MS，30m×0．25mm
進樣口溫度：250~C
進樣方式：不分流
進樣體積：2ul。
柱溫程序：100℃保持lmin，30~C／rolm升溫至280~C，10min
載氣：氦氣，純度>99，995％，流速：lmi／mln（恒流）
b.質譜條件
離子源：負化學源
溶劑延遲：5min
傳輸線溫度：250~C
離子源溫度：200~C
反應氣：甲烷，純度>99．995％，1．0ml／min
選擇離子監測（M／Z）：376，378，468，470
保留時間：8．9min左右
c．測定 樣品峰與標樣的保留時間之差不多于2s，至少檢測到4個選擇離子，即466、468、470、376，其中選擇離子466是基峰；選擇離子468的相對強度（與基峰的比例）不超過標準相應選擇離子相對強度平均值的120％；選擇離子470的相對強度（與基峰的比例）不超過標準相應選擇離子相對強度平均值的~30％；選擇離子376和離子378的相對強度（與基峰的比例）不超過標準相應選擇離子相對強度平均值的--50％。
選擇離子監測（SIM）法計算面積，根據樣品液中氯霉素含量的情況，選定峰面積相近的標準工作溶液，做單點或多點校準，以離子峰（m／z 466）的峰面積積分值定量。標準工作溶液和樣品液中氯霉素衍生物的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內。對標準工作液和樣品液等體積參插進樣測定。
④空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
（4）計算 按下式計算供試樣品中氯霉素的殘留量（ug／kg）
X=ACsV/Asm
X--試樣中氯霉素殘留含量，bg／k8；
A--樣液中氯霉素衍生物的峰面積；
As--標準工作液中氯霉素衍生物的峰面積
Cs--標準工作液中氯霉素的濃度，”8／ml；
V--樣液zui終定容的體積，mi
m--所稱取的試樣量，g。
注：計算結果應扣除空白值，測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留小數點后2位數字
（5）檢測限和回收率
本方法的檢測限為0．1ug／kg。
在0．10—10"8／ks添加濃度水平上，回收率范圍為70％～110％。