化工儀器網
技術文章
α2巨球蛋白（α2M） 的測定
閱讀：820 發布時間：2010-12-23α2巨球蛋白（α2-macroslobulin，α2M）是血清中有重要生物學活性的大分子糖蛋白，分子量725kD。主要由肝臟合成，骨骼肌也能合成，半壽期約10d。α2M是一種廣譜蛋白酶抑制劑，可與多種肽鏈內切酶形成不可逆性復合物，是纖溶酶的主要抑制物，在維持出、凝血平衡上具有重要作用。它除具有抗放射損傷作用外，尚可參與免疫調控。業已證實，α2M在體內外能抑制多種免疫反應，與慢性肝、腎疾病的關系較為密切。因為血清中α2M含量較高，故用單向免疫擴散法、火箭電泳法、速率散射濁度法等即可檢測。在純化α2M的基礎上，制備α2MMcAb，建立敏感性、特異性及度較高的ELISA法，可以檢測含量很低的尿液中的α2M。現介紹雙抗體夾心ELISA法檢測尿中a2M。
1．試劑 α2M的制備：取抗凝血漿1份加0．02mol／LpH7．4PBS2份，于攪拌下緩慢滴加50％PEG 6 000，使PEG的zui終濃度為4％，攪拌15rain后，離心棄上清。沉淀用生理鹽水溶解后過Sepharose 4B-抗人a2MMcAb親和層析柱，充分洗脫后，用3mol／LKCNS解吸附，解離液用生理鹽水透析后再過Sepharose4B-抗人IgC柱，吸附殘留的IgG，收集穿流液，濃縮后鑒定.
2．操作步驟 按雙抗體夾心ELISA法四步程序進行。即用抗人a2MMcAb包被微孔板，4℃過夜，取出洗滌；加入用PBS 1：2稀釋的尿液標本，37℃ 2h，洗滌；加入羊抗人α2M多克隆抗體，37~C 2h，洗滌；加入HRP標記的兔抗羊IsC，孵育后加入底物呈色。終止反應后在酶標儀上讀取492nm波長的吸光度值。按常規繪制標準曲線，算出待測血a2M含量。
3．正常值范圍與臨床意義 免疫擴散法測得正常男性血清a2M為1．5～3．5z／L，女性為1．35～4．2g／L。2—4歲兒童血清a2M約為成人的2～3倍。更年期婦女血清e2M含量也較高。ELBA法檢測正常人尿液中Q，M含量均低于0．026mg／L。
慢性活動性肝炎，肝硬化，急、慢性腎炎，腎病綜合征，糖尿病，惡性腫瘤，活動性結締組織病等患者的血清a2M含量升高。此外，妊娠、服用避孕藥物時02M含量也升高。在流行性出血熱和肝炎全過程中，發現疾病進展時a2M升高，進入恢復階段則降至正常水平，動態觀察a2M變化可作為病情判斷的指標。直接測定尿中02M含量，可對腎臟的早期損害提供有價值的輔助診斷。