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技術文章

IL-8的誘生與IL—8的免疫學檢測

閱讀:529          發布時間:2012-5-12

IL-8由單核/巨噬細胞、成纖維細胞、上皮細胞和內皮細胞等多種細胞產生,其主要生物活性是激活中性粒細胞。
多用人外周血或臍帶血單個核細胞,也可用體外培養傳代細胞系。LPS、PHA、ConA、IL-i、TNFa均是較理想的刺激劑。
1.常規分離PBMC,洗滌后,調整細胞濃度為5X106/mL。
2.加入終濃度為1ug/mL的LPS及10mg/mL的PI-IA,混勻后置37%,5%C02溫箱中培養48h,離心收集上清。
3.用HCl將培養上清調為酸性(pI-14.0),經SephadexG-75柱分離,收集活性組分即為IL-8粗制品。

免疫學檢測法
1.雙抗體夾心法ELISA 同常規夾心法ELISA。
2.原位免疫細胞化學測定法 該法用于測定細胞漿內IL-8含量。首先將待測細胞(如皮膚成纖維細胞)培養于平皿中的蓋玻片上,加入適當的刺激劑(如IOOU/mL的hlL-1。),共孵育一定時間;將載玻片取出,空氣干燥后在丙酮中固定10min;將蓋玻片粘附于載玻片上,加入適當濃度的抗IL-8McAb,室溫反應30rain,沖洗后加入酶標的第二抗體,沖洗后加底物顯色,顯微鏡下觀察。

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