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PCR和寡核苷酸芯片技術檢測致病性蠟樣芽孢桿菌
閱讀：1171 發布時間：2011-1-18 1．應用PCR技術檢測蠟樣芽孢桿菌
王振國、劉金華等利用PCR技術檢測致病性蠟樣芽孢桿菌，對致病性蠟樣芽孢桿菌溶血素hblA基因序列進行分析，設計一對特異引物，通過優化PCR反應條件，來實現對致病蠟樣芽孢桿菌的快速檢測，結果是該方法具有較強的靈敏性及特異性，能夠對腸毒素型蠟樣芽孢桿菌進行有效的檢測，其zui低檢出限可達9CFU／m1，用PCR技術對食物樣品中致病性蠟樣芽孢桿菌的檢測取得與普通生化檢測方法一致的結果。結果證明利用PCR技術對食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測較常規的生化檢測方法具有省時省力的特點且靈敏性較高，具有較強的實際應用價值
胡玉山、江麗芳、洪幫興等運用UP-PCR技術進行食源性感染常見致病菌Hsp60基因的擴增與酶切鑒定，采用UP-PCR法擴增其Hsp60基因，并對PCR產物進行酶切鑒定分析。結果對13種食源性感染常見致病菌均可以擴增出約1．1kb的基因片段，蠟樣芽孢桿菌PCR產物經HindⅢ酶切后形成約684bp和470bp片段，小腸結腸炎耶爾森菌PCR產物經BglⅡ酶切后形成861bp和296bp片段。
王振國、劉金華、徐寶梁等應用實時熒光PCR檢測致病性蠟樣芽孢桿菌，他們利用SYBRGeen工染料能與雙鏈DNA結合發出熒光的特點，建立了一種用來檢測致病性蠟樣芽孢桿菌（兄cereus）的實時PCR。該方法對致病性蠟樣芽孢桿菌致病相關基因cereolysisAB基因序列進行分析，設計1對特異引物，通過對SYBRGeenI實時PCR反應條件的優化，實現對致病性蠟樣芽孢桿菌的檢測。結果是該方法具有較強的靈敏性及特異性，能夠對致病性蠟樣芽孢桿菌進行有效檢測，其zui低檢出限可達8CFU／ml。利用該技術檢測蠟樣芽孢桿菌，較常規的生化檢測方法具有省時省力的特點，且靈敏性較高，具有實際應用價值。
2．應用寡核苷酸芯片技術檢測蠟樣芽孢桿菌
洪幫興、江麗芳、胡玉山等應用寡核苷酸芯片技術檢測食源性感染常見致病菌。方法為利用帶正電荷尼龍膜為芯片載體，合成寡核苷酸探針，點樣于載體制成寡核苷酸芯片，對食源性感染常見致病菌23SrDNA基因片段擴增產物進行雜交檢測。結果表明在同一條件下運用設計的通用引物擴增出16種（屬）細菌23SrDNA基因片段。大腸埃希菌、沙門菌、志賀菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、變形桿菌、單核細胞增生李斯特菌、蠟樣芽孢桿菌、肉毒梭菌和空腸彎曲菌等10種（屬）菌雜交結果顯示具有高靈敏度和特異性；金黃色葡萄球菌、鏈球菌、小腸結腸炎耶爾森菌和產氣莢膜梭菌等4種（屬）菌，未能顯示預期的種（屬）雜交結果；而應用食源性感染模擬標本，檢測肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌這兩種與食源性感染無關的致病菌時未與芯片上探針出現雜交反應，檢出水平可達10CFU／m1。建立的寡核苷酸芯片技術在食源性感染常見致病菌的檢測上快速準確等優點，為食源性感染的診治與預防提供了有效的技術手段和方法依據。