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抗組蛋白抗體(AHA)測定

閱讀:2023          發布時間:2011-6-20
   組蛋白是一種與DNA結合的富含賴氨酸與精氨酸的堿性蛋白,由H1、U2A、H2B、H3、H4 5個亞單位構成。藥物性紅斑狼瘡和SEE病人血清中有抗組蛋白抗體(antihistonic antibody,AHA),RA病人血清中也可測到AHA。目前檢測AHA方法甚多,但以EHSA法和熒光抗體法較實用。現介紹ELISA法檢測AHA。
 
    1.試劑  組蛋白抗原:可購買商品或從小牛胸腺中制備,并經SDS-PAGE證實有5個亞單位。
 
    2.操作步驟  以2.5ug/mL組蛋白抗原200~L包被聚苯乙烯微孔板,置4℃ 20h后,棄去抗原包被液,加入0.3%明膠溶液以阻斷未被抗原包被的部位。次日加入待測血清200uL(稀釋成1:200),室溫孵育2h,經PBS-吐溫及PBS緩沖液洗滌后,加入zui適工作濃度的HRP標記的羊抗人IRC或羊抗人IgM各200mL,室溫孵育2h后,分別以PBS-吐溫和PBS溶液沖洗各3次,加入底物2,2’-連氮-雙[3—乙基苯并噻唑啉-6—磺酸鹽](ABTS)200uL,置室溫孵育2h后,以410nm測定各孔吸光度(A)。A值大于正常值范圍定為陽性。
 
    3.正常參考值與臨床意義  因檢測方法不同,AHA的正常值范圍也各異。應在建立方法后,各自訂出正常值范圍。如唐福林等(1990)采用上述ELISA法檢測AHA的A值X二0.324,2S:0.219(正常值范圍0.105—0.543),A值大于0.543視為陽性。
 
    AHA在藥物性狼瘡病人中陽性率達90%—100%,且與Sm或RNP呈交叉反應,而自發性SLE病人中陽性率僅為20%—35%,且大多出現在疾病活動期,抗體是H1、H3-H4組分。以kG-AHA為主的SLE病人,其心包炎、腎炎、關節炎發生率高于以IgM-AHA為主的SLE病人,因此IeC-AHA測定有助于臨床治療的監測。BA病人的AHA陽性率也較高(可達36%),以IgM-AHA為主,與AHA陰性者相比,關節外表現更為突出,可作為診斷時參考。

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