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熱點應用丨內標物:定義、選擇策略與應用優勢

閱讀:1448      發布時間:2025-2-24
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何為氣相色譜中的內標物?

內標物(Internal Standard, IS)指在定量分析中,以恒定濃度添加至所有待測樣品的化學物質。該技術廣泛應用于色譜與光譜分析領域,可顯著提升數據可靠性。

計算原理與誤差校正機制

目標分析物的定量計算不直接依賴其峰面積,而是通過峰面積比實現:

峰面積比 = 分析物峰面積 / 內標物峰面積

 

此方法可有效抵消樣品前處理與儀器進樣環節的波動影響。由于內標物與目標物在實驗流程中經歷相同干擾,二者的響應變化呈同步性,通過比值計算可系統性降低隨機誤差與系統誤差,提升結果精密度,減少重復實驗需求。

 

內標物篩選原則

核心篩選指標包括:

● 分離度:確保內標物與樣品基質及其他組分無交叉干擾;

● 物化性質匹配性:優先選擇與目標分析物極性、揮發性等性質相近的物質,以保證保留時間、峰形及檢測器響應的一致性;

● 同位素標記策略:在GC-MS分析中,常采用目標物的氘代衍生物作為內標(如氘代丁子香酚),因其理化特性高度相似但質譜信號可區分。

 

內標物使用規范

● 濃度控制:全程保持內標物濃度恒定,且與目標物濃度范圍相近;

● 前處理階段介入:樣品制備初期添加內標物,可校正提取、純化等步驟的回收率偏差,尤其適用于復雜基質樣本;

● 多內標聯用:針對多組分/寬濃度體系,可依據目標物結構差異分級使用多個內標,例如:

1、低濃度組分選用高響應內標;

2、極性差異組分匹配對應極性的內標。


案例驗證:內標物對精密度的影響

實驗設計

● 樣品體系:丁子香酚技術級原料(TGAI,配制兩組方法精密度樣本(n=5,0.5 mg/mL);

● 對照組:純乙腈定容;

● 實驗組:乙腈含十六烷內標溶液(0.5 mg/mL);

● 儀器條件:賽里安8500氣相色譜儀,配置FID檢測器、SCION-5色譜柱。

 

 

 

image.png

 

▲賽里安8500 GC氣相色譜儀

 

結果

色譜圖及數據


 

圖片
圖1 丁子香酚(無內標)色譜圖

 

▼表1 5次平行測定的丁子香酚(無內標)數據
圖片

 

圖片

 

圖2 丁子香酚(添加十六烷內標)色譜圖

 

▼表2 5次平行測定的丁子香酚(添加十六烷內標)數據
圖片

 

 

結果分析

如表1所示,未使用內標時,5次平行測定的丁子香酚峰面積相對標準偏差(RSD)為0.48%;而添加十六烷內標后(表2),RSD降至0.11%,精密度提升0.37%。十六烷因其與丁子香酚的保留行為匹配度高、峰形對稱且無共流出干擾,顯著降低了進樣體積波動與柱效變化對定量結果的影響。

 

 

 

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