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關(guān)于核酸變性預(yù)制膠的操作步驟,你了解多少?

閱讀:4418      發(fā)布時間:2021-5-13
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  核酸變性預(yù)制膠在分離片段DNA分子時效果很好,分辨率很高,甚至相差1bp的DNA的片段都能分開,一個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)樣孔中可以容納相對大量的DNA。所以常被用于蛋白印跡實(shí)驗(yàn)、遺傳圖譜構(gòu)建、數(shù)量形狀基因定位、標(biāo)記輔助選擇等生物多樣性研究等。
  
  核酸變性預(yù)制膠的操作步驟:
  
  一、非變性預(yù)制膠:
  
  1、準(zhǔn)備樣品:將樣品和loadingbuffer(5×)按照4:1混合均勻。
  
  2、準(zhǔn)備1×runningbuffer:取200ml的5×TBEbuffer,加入去離子水至1L,制備成1×TBEbuffer。
  
  3、將預(yù)制膠裝入兼容的電泳槽中,加入電泳緩沖液,再緩慢地將梳子拔出。
  
  4、上樣:在梳孔內(nèi)加入適當(dāng)濃度和體積的DNA樣品。
  
  5、電泳條件:150V,50~75min(電泳時間取決于凝膠濃度)
  
  6、電泳結(jié)束,取出凝膠。
  
  二、尿素變性預(yù)制膠:
  
  1、準(zhǔn)備樣品:將樣品和UREA-TBEloadingbuffer(5×)按照4:1混合均勻,100℃下加熱3-5min。
  
  2、準(zhǔn)備1×runningbuffer:取200ml的5×TBEbuffer,加入去離子水至1L,制備成1×TBEbuffer。
  
  3、將核酸變性預(yù)制膠裝入兼容的電泳槽中,加入電泳緩沖液,再緩慢地將梳子拔出。
  
  4、上樣:用1×TBEbuffer反復(fù)沖洗梳孔以清除梳孔內(nèi)的尿素,在梳孔內(nèi)加入適當(dāng)濃度和體積的DNA樣品。
  
  5、電泳條件:150V,50~75min(電泳時間取決于凝膠濃度)
  
  6、電泳結(jié)束,取出凝膠。

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