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抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒 維生素C
貨號：BC0220
規格：50管/48樣
產品簡介：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負相關性。
APX催化H2O2氧化AsA，通過測定AsA 的氧化速率，可計算得APX 活力。
試驗中所需的儀器和試劑：
低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。
產品內容：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL雙蒸水充分溶解；
試劑三：液體×1支，4℃保存。
操作步驟：
一、粗酶液提取 ：
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
二、測定操作表：
1. 分光光度計預熱30 min以上，調節波長到290 nm，用蒸餾水調零。
2. 試劑一在25℃中預熱30min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、700μL預熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。
4. 測定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL預熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10 s和130 s光吸收A3和A4，△A測定管=A3-A4。
APX活力計算：
(1) 按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×106÷(Cpr×V樣)÷T
=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷ Cpr
ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數為2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；T：催化反應時間（min），2min。
（2）按樣本質量計算
單位的定義：每g組織每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/g ) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×106÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷W
ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數為2.8×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×106μmol；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質量，g；T：催化反應時間（min），2min。
抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒 維生素C
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