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全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀的原理與應(yīng)用
點(diǎn)擊次數(shù)：5428 發(fā)布時(shí)間：2016-12-22
全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀的原理與應(yīng)用
酶標(biāo)儀（Microplate Reader）是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（EIA）實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專(zhuān)業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。
一、酶標(biāo)儀的工作原理
使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過(guò)標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，zui后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果. 微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè)，因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單.
微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.
光是電磁波，波長(zhǎng)100nm～400nm稱(chēng)為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱(chēng)為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光，但對(duì)綠色不吸收，反射出來(lái)，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。
隨著檢測(cè)方式的發(fā)展，擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀，可檢測(cè)吸光度（Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學(xué)發(fā)光（Lum)。
酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的任意波長(zhǎng)，而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。
二、酶標(biāo)儀的應(yīng)用
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng) 用，使得酶標(biāo)儀在繁殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，同時(shí)促進(jìn)了繁殖健康技術(shù)水平提高。目前在國(guó)內(nèi)血站臨床試驗(yàn)室中酶標(biāo)儀成為ELISA測(cè)定的重要工具。在農(nóng)業(yè)中利用酶標(biāo)儀研究酚氧化酶，為開(kāi)發(fā)以該酶為靶標(biāo)的新型害蟲(chóng)控制劑提供理論依據(jù)。伏馬菌素是zui近發(fā)現(xiàn)的一族主要由幾種真菌產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)相關(guān)的毒素代謝產(chǎn)物，該毒素已被世界衛(wèi)生組織列為近年來(lái)首先進(jìn)行研究的幾種霉菌毒素之一。因此快速、的檢測(cè)伏馬菌素便顯得尤為重要。在450nm或630nm的濾鏡下使用酶標(biāo)儀對(duì)微孔板進(jìn)行光學(xué)測(cè)量，可以檢測(cè)伏馬菌素的含量，在食品安全方面有著重要的應(yīng)用。生長(zhǎng)曲線一般指菌落總數(shù)CFU/mI。或者菌落總數(shù)的對(duì)數(shù)log CFU/ml。隨時(shí)間變化曲線，可用來(lái)展示微生物生長(zhǎng)情況和新陳代謝規(guī)律。目前通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定菌懸液時(shí)存在即時(shí)性差、操作繁瑣、易污染等缺點(diǎn)，由于酶標(biāo)儀是一種快速、準(zhǔn)確、高通量的儀器，所以我們總會(huì)選擇使用酶標(biāo)儀來(lái)進(jìn)行菌懸液OD值的測(cè)定，來(lái)提高工作效率，節(jié)約時(shí)間。