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豚鼠T淋巴細(xì)胞的測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：1920 發(fā)布時(shí)間：2012-2-14
玫瑰花環(huán)試驗(yàn)，又稱為花結(jié)試驗(yàn)。是測(cè)定淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能的一種方法。
人類T和B淋巴細(xì)胞表面具有不同的受體。由于人類T淋巴細(xì)胞表面具有與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合的受體，能與綿羊紅細(xì)胞非特異性結(jié)合，形成E花環(huán)，因此，T細(xì)胞也成為紅細(xì)胞花瓣形成細(xì)胞。根據(jù)E—玫瑰花環(huán)形成率，可以間接判斷機(jī)體細(xì)胞免疫力。目前，已廣泛應(yīng)用于臨床，作為測(cè)定人群免疫狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。
材料：
1.肝素(100單位/毫升)
2.0.5%兔紅細(xì)胞懸液(用Hanks液配制)
3.吸收過的胎牛血清：
取經(jīng)56℃30分鐘加熱滅活后的胎牛血清加半量壓積兔紅細(xì)胞混合后，37℃水浴20分鐘，2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液即成。
4.Hanks液
5.豚鼠抗凝血
6.淋巴細(xì)胞分層液
7.滅菌注射器，針頭，試管，吸管等。
方法：
1.淋巴細(xì)胞提取
(1)取豚鼠抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀釋。加于3毫升淋巴細(xì)胞分層液液面之上。
(2)2000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，吸淋巴細(xì)胞層到另一試管中加5倍體積的Hanks液洗1—2次，(1500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘)棄上清即成。
1. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升，0.5%兔紅細(xì)胞懸液0.2毫升，于淋巴細(xì)胞中。混合后，37℃水浴5分鐘。
2. 500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，放4℃冰箱中2小時(shí)后，棄大部分上清。
3. 染色及觀察輕輕懸浮沉積的細(xì)胞。向懸液中滴一滴美蘭液，混合，10分鐘后取一滴放載玻片上，加蓋玻片鏡檢。高倍鏡或油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，凡結(jié)合3個(gè)或3個(gè)以上的兔紅細(xì)胞者為陽性，計(jì)算花環(huán)形成細(xì)胞的百分率。