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柱式全血RNAout
點擊次數：1587 發布時間：2013-6-25
柱式全血RNAout
產品及特點 本產品經過天澤基因精心優化而得，多項指標超過國內外同類產品。本產品是天澤基因在血液RNAOUT（CAT#：3071）基礎上開發的柱式升級產品，專門從動物全血樣品中快速提取總RNA。跟血液RNAOUT相比，本產品具有下列特點：
1. 比血液RNAOUT更加簡單快捷，直接使用新鮮的或冷凍的抗凝全血樣品，不需裂解紅細胞等任何預處理步驟，整個提取過程只需要十分鐘左右，可以全在室溫下進行。
2. 產量和純度更高，OD260/280均在2.0左右，產率一般為2-5 ug/mL人血。
3. 每次微量提取的zui大樣品處理量可以達到1.5 mL，高于進口的同類產品。
4. 與常用的抗凝劑（包括肝素，EDTA，檸檬酸鈉，草酸鈉）兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern雜交等研究。
規格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊 1份
運輸及保存 常溫運輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 1. 將0.2-1.5 mL新鮮或解凍后的抗凝全血加入到1.5 mL塑料離心管中。
2. 12000-15000 g室溫離心3分鐘，棄上清（血漿）。如果此時血液細胞沉淀體積大于0.2 mL， 則需要減少血液的使用量，具體減少量需根據具體情況決定，因為各個個體（尤其是患者）血液中白細胞數目差別很大。
3. 將1 mL溶液A加入到血液細胞沉淀中，用移液槍吹打沉淀使細胞裂解。
4. 將0.3 mL的溶液B加入到離心管中，劇烈震蕩30秒。
5. 和0.2 mL氯仿加入到離心管中，劇烈震蕩30秒。
6. 12000-15000 g室溫離心3-5分鐘，將上清液（為無色或淺紅色，約0.5-0.9 mL）轉移到另一干凈離心管中。注意：轉移的液體不要超過0.7 mL，否則下一步不能加入等體積的溶液C。為防止污染，留100 uL左右的上清液。下層有機相一般呈深紅色，中間層為白色，含有DNA，蛋白質和其他細胞破碎物，避免觸及或吸取。
7. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
8. 分兩次將溶液轉移到離心吸附柱中，每次轉移后12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。注意：增加此步可以進一步提高RNA的純度。
11. 室溫12000-15000 g離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響RNA的后續反應。
12. 將離心吸附柱轉移到一個RNase-free的收集管中，加入50-100 uL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 12000-15000 g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
15. RNA產量產率測定：將5-10 μL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進而計算出RNA的產量（濃度X體積）和產率（RNA產量/組織用量）。人血RNA產率一般為2-5 ug/mL。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在2.0左右（具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關），高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染，但一般不影響RT-PCR等反應。