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紫外可見分光光度計定量、定性分析需注意的問題

時間:2023/6/2閱讀:1238
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使用紫外可見分光光度計進行定量和定性分析需注意以下一些問題:

吸光度讀數范圍:吸光度測量誤差在透過率過大或過小時都會變大,為了滿足定量分析的誤差要求(<5%),在定量分析時要求吸光度應在一定的范圍內,這個范圍的具體值與儀器性能有關,主要是與紫外可見分光光度計檢測系統噪聲大小有關,但通常都在0.1~1.0范圍內,如果儀器的檔次更低,則范圍更窄。根據朗伯比爾定律,影響吸光度大小的因素主要是樣品摩爾吸光系數,濃度和比色皿光程。實驗中吸光度過大的樣品可通過稀釋樣品使吸光度到所需范圍內。如果樣品不能稀釋,可以改用光程較小的比色皿減小吸光度。吸光度過小的樣品可使用光程較大的比色皿以增大吸光度。

吸收波長的選擇:進行單波長測量時,需要考慮朗伯比爾定律對入射光單色性的要求和測定靈敏度的要求。沒有干擾時,一般選擇在吸收峰的大吸收波長位置處,如果有干擾,選擇在沒有干擾且吸光度變化較平緩的位置。 進行多波長校正時,除盡量滿足單波長測定的波長要求外,還要求多個組分間的吸收光譜間線性無關。 

狹縫的選擇:狹縫的大小會影響到儀器的信噪比和標準曲線的線性范圍。狹縫過大,通常會使線性范圍變小,特別是當不在大吸收波長位置測定時更是如此。狹縫過小,信噪比變差,基線平直度和測量數據的重復性會變差。此外,還需要考慮樣品吸收峰寬度的影響。通常單波長測定時,一般選擇在大吸收波長位置,線性范圍容易滿足,可選擇較寬的狹縫(1~2nm)多波長測定時,很難同時在所有波長都滿足線性范圍要求,應選擇比較小的狹縫。 

重復測定次數和波長掃描速度:對吸光度不是很大的樣品,或者狹縫不是很小,這是檢測器檢測的光信號的強度是比較大的,重復性較好,可選擇較少的重復次數。相反,如果樣品吸光度很大,狹縫很小,選擇較大的重復次數可獲得更好的結果。 

測定波長間隔:在掃描光譜時需要選擇,可根據樣品吸收峰的寬度進行選擇,峰寬較大時,可選擇較大的波長間隔。反之亦反。通常每個正常的吸收峰應該用不少于30個數據點表示出來。

 

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