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如何利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期
首先我們這邊先來看下這樣的問題：新消化獲得的細(xì)胞直接染色立馬上機(jī)檢測，這一步是不是必須的？RnaseA的作用包不包括去處胞內(nèi)的雙鏈RNA？是的話，RnaseA能直接穿膜嗎？不是的話，胞內(nèi)的雙鏈RNA不管了？陰參的設(shè)定是不是健康成人外周血的淋巴細(xì)胞就可以了？
根據(jù)這樣的染色方法而定，原理都是先打孔再染色，因為PI沒有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。現(xiàn)在基本有兩種方法，一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多，優(yōu)點是作用比較輕柔，可長時間固定，一般一個月都沒問題，更長時間我沒試過。適用于不能預(yù)計上機(jī)時間的朋友，可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī)。缺點就是打孔時間較長，至少過夜才能保證打孔效果。
根據(jù)這樣的染色方法而定，原理都是先打孔再染色，因為PI沒有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。現(xiàn)在基本有兩種方法，一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多，優(yōu)點是作用比較輕柔，可長時間固定，一般一個月都沒問題，更長時間我沒試過。適用于不能預(yù)計上機(jī)時間的朋友，可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī)。缺點就是打孔時間較長，至少過夜才能保證打孔效果。
另一種就是用Triton打孔，這種方法比較激烈。優(yōu)點是速度快，消化以后可以馬上打孔染色上機(jī)，而且不使膜蛋白變性，不容易造成粘連。缺點就是不能長時間保存樣品，一般好半個小時內(nèi)檢測，不然時間越久細(xì)胞DNA含量的離散度越高，圖像越難看。不過現(xiàn)在很多的試劑盒都是用這種快速打孔的方式。
膜通透性改變以后酶可以進(jìn)去。