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技術文章

ELISA檢測試劑盒的抗體免疫學反應檢測

閱讀:2201          發布時間:2016-12-20

   現在已有多種自動化儀器用于微量反應板型的ELISA檢測試劑盒,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標準化極為有利。良好的elisa試劑盒板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產品的質量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內加入適當稀釋的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應后分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件,使各讀數在0.8左右。計算所有讀數的平均值。


  所有單個讀數與平均讀數之差應小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特點為質軟板薄,可切割,價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時也略高。免疫熒光技術雖已廣泛應用于免疫學的研究與診斷,但是熒光抗體染色標本不能長期保存,對組織細胞的細微結構分辨不清,免疫酶技術則能克服上述不足,標記免疫酶技術的敏感性更優于免疫熒光法,ELISA檢測試劑盒對石蠟切片標本尤為適用,為免疫病理研究開辟了一條新途徑,酶顯色產物具有較高的電子密度,經過適當處理還可以進行免疫電鏡觀察,免疫酶組化技術分為酶標記法與非標記抗體技術,前者是將酶通過交聯劑結合在抗體分子上,形成酶標記抗體。后者是將酶作為抗原與相應的特異性抗體連接進行的免疫反應,稱為非標記抗體酶技術。


   免疫酶技術利用酶催化底物反應的生物放大作用,提高特異性抗原-敏感性的一種標記免疫技術。該技術所用的酶要求純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質穩定、來源豐富、價格不貴、ELISA檢測試劑盒制備成的酶標抗體或抗原性質穩定,繼續保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在與標記酶相同的酶。另外它的相應底物應易于制備和保存,價格低廉,有色產物易于測定,光吸收高。

                           

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