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MicroRNA前體表達克隆

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所  在  地上海市

更新時間:2020-11-09 14:05:10瀏覽次數:3011次

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MicroRNA (miRNA)是從真核基因組轉錄形成的非編碼單鏈小分子RNA。它們的序列高度保守,通常是21到23個核苷酸長度。近來研究發現miRNA幾乎與所有細胞的功能和生物體生命過程有關。它們通過靶定到mRNA3’非翻譯區(3'-UTR)來調節基因的表達。MicroRNA所調節基因的表達失調與癌癥、心血管疾病、其他各種疾病有關。
 

復能基因現在提供:

  • 1048條人源、672條小鼠源、408條大鼠源miRNA插入各種表達載體中構建的miExpress™ microRNA前體表達克隆。
  • miRNA靶標的表達克隆編碼基因的3’端非翻譯區(3’-UTR)涵蓋了人類編碼基因20000個miRNA靶標表達克隆。(3’-UTR,即編碼基因的3’端非翻譯區)

利用這些miRNA表達克隆研究相應基因或者蛋白的表達調節情況。配合采用熒光素酶報告基因的靶標克隆,可以和miRNA表達克隆一起進行miRNA功能篩選合確證,以及miRNA靶標基因的篩選和確證的交互實驗。

復能基因同時也提供多套的人類基因組和小鼠基因組的全長基因ORF表達克隆。用于miRNA靶標的對應蛋白的功能互補實驗。由于這些ORF克隆不含3’-UTR,可以用于特種miRNA對內源靶基因抑制后的拯救實驗,進一步確證miRNA功能及靶標基因。

miExpress™人類基因組的miRNA前體表達克隆       

復能基因采用基于貓免疫缺陷病的慢病毒系統,構建了miRNA前體表達克隆的載體骨架。RNA聚合酶III型的H1啟動子驅動轉錄前體miRNA的莖環前體(大約有150核苷酸長度)。 隨后通過RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一載體的CMV啟動子的驅動下共表達報告基因eGFP,雙順反子下游的新霉素篩選基因也同時表達。可作為監測miRNA表達,轉染和轉化的效率的參考標準。

RISC-miRNA復合體通過結合靶基因的mRNA的3’非編碼區(3’-UTR)成功地調節靶基因。1)表達水平和翻譯水平的抑制;2)mRNA的被切割,被降解和豐度的下降。

miRNA前體表達克隆的特征

  • miRNA前體表達克隆涵蓋了miRBase(16.0版本)中已知miRNA的95%
  • miRNA表達框已*測序確證
  • 基于慢病毒載體系統的表達克隆可轉染未分化細胞和難轉化的細胞,獲得與普通分化細胞類似的轉染效率
  • 提供被轉染細胞的存活性的篩選基因,可用于穩定或瞬時表達調控
  • 通過應用eGFP可以監測病毒和質粒載體的轉染效率

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