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雙熒光素酶報告基因構建及檢測服務服務項目簡介

      報告基因是現代分子生物學研究領域中用于分析結構基因旁側區域潛在的順式元件(如啟動子、增強子和沉默子等)和反式作用因子相互作用關系的一種重要工具，在解析基因時空表達調控的內在規律中發揮著重要作用，它具有便捷、可靠、靈敏度高和適用于大規模檢測等優點。

      生興生物提供報告基因檢測服務，采用熒光素酶報告基因檢測系統，以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)活性。該系統的檢測原理是，熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發出生物熒光(bioluminescence)，然后可以通過熒光測定儀也稱化學發光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，熒光閃爍總數與樣品中存在熒光素酶的活性成正比。

雙熒光素酶報告基因構建及檢測服務服務內容

      把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在luciferase的上游或其他適當的地方，構建成報告基因質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調控元件的影響。熒光素酶催化luciferin發光的zui強發光波長為560 nm。

實驗步驟

1. 分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。
2. 構建含調控元件序列的熒光素梅報告基因載體。
3. 篩選陽性克隆，測序。
4. 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒對照，提純備用。
5. 培養目的細胞，并接種于孔板中，使生長達到80%匯合度。
6. 將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。
7. 提取蛋白并用于熒光素酶檢測。
8. 加入底物，測定熒光素酶的活性。
9. 計算相對熒光強度，并與空載對照比較。
10. 實驗報告。

應用領域

1. 熒光素酶基因標記基因
2. 熒光素酶基因標記細胞
3. 熒光素酶基因標記微生物
4. 活體生物體內成像
5. 藥物篩選
6. 雙報告基因系統