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通過與mRNAs在特異位點(diǎn)的結(jié)合，切割靶位點(diǎn)或抑制轉(zhuǎn)錄（翻譯），MicroRNAs可調(diào)控基因表達(dá)。MiRNA與靶的相互作用是由RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RISC）介導(dǎo)的。RISC介導(dǎo)的成熟miRNA與位點(diǎn)相互作用依賴于miRNA和靶位點(diǎn)的序列互補(bǔ)性以及在3 ' UTR結(jié)合位點(diǎn)的總數(shù)量。 許多重要的調(diào)節(jié)基因受miRNAs調(diào)控，如Ers受let-7，Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受miR206，TPM1受miR-21和PTEN受miR-19a調(diào)控?；诩?xì)胞分析方法的熒光素酶報(bào)告載體常用于監(jiān)測受miRNAs調(diào)控的基因。
A. 優(yōu)點(diǎn):
功能性檢測——是一種功能性的分析方法，用于監(jiān)測細(xì)胞內(nèi)miRNA介導(dǎo)的靶基因的調(diào)控
可定量分析——miRNAs介導(dǎo)的調(diào)控可以通過熒光素酶基因的表達(dá)進(jìn)行定量監(jiān)測
可構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系——載體可用于構(gòu)建表達(dá)報(bào)告基因的穩(wěn)定細(xì)胞系
B. 原理：
        pLuc-3UTR報(bào)告載體是一系列基于熒光素酶報(bào)告的構(gòu)建體，用于監(jiān)測miRNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)靶基因調(diào)控。每個載體含有CMV啟動子、熒光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40終止子序列。MiRNA的表達(dá)并與3 ' UTR結(jié)合，導(dǎo)致熒光素酶基因表達(dá)的抑制。因此miRNA介導(dǎo)的特異靶的調(diào)控可通過熒光素酶活性進(jìn)行監(jiān)測。比較二個樣本熒光素酶活性，可解析調(diào)控，明確差異。