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上海恒遠小談結合物對ELIS測定的影響

閱讀:1423          發布時間:2016-1-7

    我們都知道在ELISA的測定中,有很多方面的影響,在ELISA的檢測中也是非常重要的的一個部分,下面我們從結合物這一方面來說明。

    結合物:在ELISA中,用酶標記的抗體或抗原統稱為結合物,此為進行ELISA檢測的關鍵試劑。常規使用ELISA法的主要問題是能夠簡便地制備酶結合物,而此種制備好的酶結合物要求穩定,具有很高的酶活性,抗原或抗體的特異性,產量高及成本低。
    用什么樣的酶來標記抗原或抗體呢?可根據以下幾點來選擇適當的酶。
    1、酶制品的純度及活力高,催化效力也高,放大倍數大(即一個酶分子能催化幾十幾百個底物分子發生反應的酶)。
    2、酶及制備好的酶結合物在檢測或貯存中能保持穩定。
    3、酶制劑易得、價廉.
    4、既要適用于標記抗原,又適用于標記抗體,標記后不影響抗原或抗體的免疫學特性,也不降低酶的活性。
    5、酶的反應產物穩定,檢測時簡便、快速。在定量測定中產物必須是可溶性的。
    6、要有安全、價廉、易得的底物。
    符合上述條件的酶有:堿性磷酸酶,一般用分子量為5×105(Alkaline Phospatase,簡稱AP),辣根過氧化物酶(Horse Radish Peroxidase,簡稱HRP,分子量為4×104),另外尚有葡萄糖氧化酶,β-半乳糖甙酶,糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等。其中以前兩種(AP和HRP)zui為常用。
AP活力高,制備好的酶結合物可加NaN3防腐,但此種酶不易獲得,因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取,而且價格比較昂貴。因此,目前國內外大多使用HRP。HRP活性也高,價格較便宜。但制得酶結合物不能加NaN3防腐。因NaN3能抑制HRP的活性,但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝,保存冰箱,一般可用1-2年。

    由于HRPzui為常用,故先把HRP的一般性質介紹一下,以便在制備酶結合物時可引起注意。

    (HRP的性質):HRP系從辣根菜的根中所提取,這種酶是無色酶蛋白與暗棕色的鐵卟啉(E鐵血素)相結合的一種醣蛋白,可簡寫成由多個(6-7個)同功 酶所組成。分子量約為40000,等電點為PH7.2。能被58-62%飽和硫酸銨沉淀,在PH3.5-12均較穩定。63℃15分鐘,室溫數周、甲苯和其他苯類有機溶劑處理都不影響它的活性。

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