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ELISA試劑盒新手入門的使用技術報告

閱讀:682          發布時間:2016-3-2

的一年,上海恒遠技術專員為ELISA試劑盒新手入門的使用技術報告做出一番整理,在這里分享給您,僅供參考。

ELISA試劑盒方法原理

  一、雙抗體夾心法測定抗原

1.將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

2.加抗原,形成抗原-抗體復合物; 

3.加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復合物;

4.加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體); 

5.加底物。底物的降解量=抗原量。

二、直接法測定抗原 

1.將抗原吸附在載體表面;

2.加酶標抗體,形成抗原—抗體復合物;

3.加底物。底物的降解量=抗原量。 

三、間接法測定抗體

1.將抗原吸附于固相載體表面;

2.加抗體, 形成抗原-抗體復合物;

3.加酶標抗體;

4加底物。 測定底物的降解量=抗體量。

ELISA試劑盒操作注意

1. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

2.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

3.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

4.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

5.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

6.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

8.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

ELISA試劑盒質控分析

  1.人員培訓內容包括:①檢驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理);②熟悉檢測技巧,了解易出差錯的環節及難點;熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成,包被片段及其組成);③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數據處理的能力和質量控制知識;④某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經有關部門組織的專門培訓班,考試合格后持證上崗。

  2.基本了解

1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術應用于臨床檢驗發展為ELISA試劑盒技術。

2.特點:ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質形成"免疫吸附劑"。

3.酶標記免疫活性物質,進行信號放大;

4.有二步溫育反應二次洗滌過程;

5.靈敏度特異性相對較高。

6.局限性:只能檢測到ng水平

7.精密度差(批內CV15-20%);

8.線性范圍窄(一個數量級);

9.存在"HD-HOOK"效應。 

    以上由上海恒遠生化試劑有限公司技術人員整理,希望對新手朋友有所幫助,還需要了解更多詳細內容可以我們。

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