化工儀器網
技術文章
ELISA試劑盒的普遍應用使得實驗更加方便
閱讀：1065 發布時間：2014-6-6由于是單細胞水平檢測，ELISPOT比ELISA更靈敏，能從20萬-30萬細胞中檢出1個分泌該蛋白的細胞。
捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內毒素的單抗，ELISA試劑盒在研究者以刺激劑激活細胞時，不會影響活化細胞分泌細胞因子。
目前ELISA法仍在研究當中占有著主流地位，ELISA試劑盒的普遍應用使得實驗更加方便、經濟和準確，ELISPOT技術的優點也決定了它的發展潛力。LISPOT法來源于ELISA，相比較傳統的ELISA法有所突破，是定量ELISA技術的延伸和發展。由于游離的循環抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結合，傳統的酶聯免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內的抗體及CK的水平。80年代，國外的科研工作者根據ELISA技術的基本原理，建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和CK分泌細胞的固相酶聯免疫斑點技術(ELISPOT)。
隨著ELISPOT技術的不斷發展，它的優勢也漸漸顯示出來，下面將ELISPOT與ELISA法對比區分。
ELISA試劑盒通過顯色反應，在酶標儀上測定吸光度，與標準曲線比較得出可溶性蛋白總量。
ELISPOT 也是通過顯色反應，在細胞分泌這種可溶性蛋白的相應位置上顯現清晰可辨的斑點，可直接在顯微鏡下人工計數斑點或通過計算機輔助的分析系統對斑點進行計數， 1個斑點代表1個細胞，從而計算出分泌該蛋白的細胞的頻率。(某些研究不僅要測細胞因子生成量，還需檢測分泌此細胞因子的細胞頻率)
ELISPOT的起源可以追溯到1963年JerneELISA試劑盒等人創立的溶血空斑技術(hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF)，這項技術可用于檢測并計數單個抗體形成細胞。隨著單克隆抗體技術的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法檢測脾細胞中分泌特異性抗體的細胞數，發現該方法敏感性高簡便易行。后來，他們又用這種方法定量分析受到有絲分裂原刺激的外周血中分泌IFN2γ的細胞數。隨后，用ELISPOT法在單細胞水平檢測分泌其他細胞因子(如IL-2 ， IL-4 ， IL-5 ， IL-10 ， TNFα和IL-6) 數量的手段也被建立起來。Nordstrom 等用生物素-抗生物素蛋白生物放大法來提高這種方法的敏感性，Herr用計算機輔助圖像分析系統(computer-assisted video image analysis ，CVIA) 自動分析TNF2α酶聯免疫斑點的大小和數量，計算與負載抗原肽的靶細胞接觸后外周血單核細胞(PBMC) 中抗原特異性CD8+T細胞的數量，ELISA試劑盒不但提高了對背景染色的分辨力也使大規模研究成為可能。Vaquerano等將數碼相機和計算機結合起來，開發出類似的斑點計數系統，認為當每孔斑點數大于100時，這種方法更客觀、可重復性高且節省時間。