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利用ImageXpress Micro進行長時間活細胞成像和心肌細胞功能評價
閱讀：1612 發布時間：2012-8-16
利用ImageXpress Micro進行長時間活細胞成像和心肌細胞功能評價
活細胞成像技術是zui近幾年興起的一項技術，能夠在細胞接近生理的狀態下觀察細胞形態改變和蛋白的表達，該技術能夠避免傳統采用固定細胞或組織的研究方法中，固定細胞過程中造成的細胞形態的改變和結構改變，能夠更加真實的反映出細胞的特性，因而廣受推崇。
MD ImageXpress Micor高內涵系統具有多種特性能夠進行長達數天的活細胞的觀察，同時，由于采用的MD軟件產品MetaMorph為基礎的MetaXpress高內涵分析軟件，具有*的靈活性和擴展能力，除活細胞成像之外還能夠能夠對某些細胞（如心肌細胞）的生理藥理特性進行評價。
神經細胞長時間成像
神經細胞是*的較為敏感和脆弱的細胞，對于外界環境較為敏感。對于活的神經細胞的長時間培養和觀察具有較大困難。采用ImageXpress Micro系統能夠實現神經細胞的長時間觀察培養。
方法：
從新生大鼠大腦海馬獲得約1立方毫米大小組織塊。移入含有0.25%胰酶的離心管中37℃，5%CO2 孵育箱內消化20～30 min。加入含胎牛血清的培養液終止消化，離心重懸細胞，按0.6×105/ml 鋪于96 孔板中。24 h 后換為NeurolbasalMedium/B27 無血清培養液，以后每2~3 d 半量換液1 次。7 d 后獲得原代神經細胞。
圖像獲取：
將樣品放入有環境控制功能的MD ImageXpress Micro高內涵系統內，采用激光自動聚焦進行樣品聚焦，在10X物鏡下每隔5分鐘進行一次相差圖像拍攝，結果如下：
小結：
ImageXpress Micro采用的環境控制系統能夠維持細胞所需的溫度、濕度和CO2條件，其中溫度為細胞的酶活性提供了溫度保障，確保細胞的生理機能，濕度維持能夠保證細胞外液不會蒸發，避免了胞外滲透壓的升高造成的細胞脫水，CO2能夠維持細胞外液的pH值。
除了維持細胞的生存環境外，在進行敏感、脆弱細胞（如神經細胞）的長時間觀察過程中，zui為重要的是減小對細胞的刺激，盡可能的保持細胞的活性。ImageXpress Micro采用激光自動聚焦技術，在聚焦的過程中，細胞無需受到光照，這樣就避免了細胞內的光化學反應和光照升溫，能夠很好的維持細胞的活性狀態。因此，在長時間活細胞的觀察過程中，以上兩點*。
心肌干細胞細胞的功能評價
ImageXpress Micro采用的軟件系統功能強大，具有無限的擴展功能。因此，除了能夠實現活細胞的長時間觀察和細胞的形態、蛋白表達等分析，ImageXpress Micro還能夠實現細胞功能學的評價。
干細胞研究是目前生物學研究的熱點，采用人類的干細胞（如心肌干細胞）能夠加快研究的速度，同時還能夠真實反映人體細胞的功能，還能加快藥物進入臨床的速度。iPS來源的心肌細胞因其表達的離子通道、自發節律特性、與原代心肌細胞特性相似的特性尤其引人注目，通過該細胞可以進行心肌細胞特性的研究，并能縮短藥物篩選的時間與臨床前實驗的周期。
方法：
采用Cellular Dynamics公司的iPS來源的心肌細胞，將其鋪于96孔板，并在培養液中孵育2-7天，以Calcein AM孵育10分鐘，將培養液棄去后，加入不同濃度的激動劑和抑制劑。