第三法

原理在酸性條件下溴化氰與吡啶聯(lián)苯胺發(fā)生顯色反

應(yīng)，采用紫外-可見分光光度法測定H ib多糖衍生物中溴化

氰的含量。

試劑 （1 )6 0%的吡啶溶液量取吡啶30ml，加水

20ml，搖勻，即得。

(2)2%鹽酸溶液量取鹽酸0.5ml，加水9. 5ml，搖勻，

即得。

(3 )吡啶聯(lián)苯胺溶液取聯(lián)苯胺0.5g，精密稱定，加

60%吡啶溶液50ml使溶解，再加人2%鹽酸溶液10ml，搖

勻，即得。臨用前配制。

對照溶液的制備（1)0. 1 m g /m l溴化氰對照貯備液

取溴化氰10mg，精密稱定，加乙腈適量使溶解，加水稀釋

至100ml，搖勻，即得。臨用前配制。

(2 )溴化氰對照工作液（500ng/ml) 精密量取溴化氰對

照貯備液lm l，加水稀釋至200ml，搖勻，即得。

供試品溶液的制備取多糖衍生物適量，配制成lOmg/ml

的溶液，即得。

測定法量取吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml，加水2. Oml，混

勻，2CTC以下、暗處放置1 5分鐘后，在波長520mn處測定

吸光度，作為空白對照。

量取供試品溶液2. O m l加吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml, 混

勻，20X：以下、暗處放置1 5分鐘后，在波長520nm處測定

吸光度。

分別量取溴化氰對照工作液0.1ml、0.2ml、0.4ml、

0.6ml、0.8m l、1. Om l于試管中，每管依次加水1.9ml、

1.8ml、1.6ml、1.4ml、1.2ml、1.0ml，加人P比嗤聯(lián)苯胺溶

液2. Oml，混勻，20°C以下、暗處放置1 5分鐘后，在波長

520mn處測定吸光度。

結(jié)果計算以對照工作液中溴化氰的含量（ng/ml) 對其

相應(yīng)的吸光度作線性回歸，求得線性回歸方程，將供試品溶

液的吸光度代人線性回歸方程，求得供試品溶液中溴化氰的

含量 B (n g/m l) 。

供試品中溴化氰的含量（ng/mg) = |

100