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ELISA試劑盒不同的指示劑在不同的酸堿環境下呈現不同的顏色。
指示劑的分類
1、酸堿指示劑。指示溶液中H+濃度的變化，是一種有機弱酸或有機弱堿，其酸性和堿性具有不同的顏色。指示劑酸HIn在溶液中的離解常數Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的顏色決定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又決定于[H+]。以甲基橙（Ka=10-3.4）為例，溶液的pH<3.1時，呈酸性，具紅色；pH>4.4時，呈堿性，具黃色；而在pH3.1～4.4，則出現紅黃的混合色橙色，稱之為指示劑的變色范圍。不同的酸堿指示劑有不同的變色范圍。
2、金屬指示劑。絡合滴定法所用的指示劑，大多是染料，它在一定pH下能與金屬離子絡合呈現一種與游離指示劑*不同的顏色而指示終點。
3、楊Hau還原至實際。為氧化劑或還原劑，它的氧化形與還原形具有不同的顏色，在滴定中被氧化（或還原）時，即變色，指示出溶液電位的變化。
4、沉淀滴定指示劑。主要是Ag+與鹵素離子的滴定，以絡酸鉀、鐵銨礬或熒光黃作指示劑。
常見指示劑的變色范圍
石蕊                變色范圍       PH5.8——8.0         由紅色變為藍色
甲基橙              變色范圍       PH3.1——4.4         由紅色變為黃色
酚酞                變色范圍       PH8.2——10.0        由無色變為紅色
甲基紅              變色范圍       PH4.4——6.2         由紅色變為黃色
溴百里酚藍          變色范圍       PH6.2——7.6         由黃色變為藍色
用以指示滴定終點的試劑。在各類滴定過程中，隨著滴定劑的加入，被滴定物質和滴定劑的濃度都在不斷變化，在等當點附近，離子濃度會發生較大變化，能夠對這種離子濃度變化作出顯示（如改變溶液顏色，生成沉淀等）的試劑就叫指示劑。
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