英文名稱：DyLight 594 Maleimide-Labeled Streptavidin
中文名稱：DyLight 594 馬來酰亞胺標記鏈霉親和素

一、物質概述

DyLight 594 MAL 鏈霉親和素是一種通過化學修飾將熒光染料DyLight 594與鏈霉親和素（Streptavidin）結合的復合物。其核心功能基團為馬來酰亞胺（Maleimide, MAL），用于特異性標記含巰基（-SH）的生物分子。該復合物在生物標記領域具有應用潛力，其制備過程涉及多步化學與生物技術操作。

二、制備步驟

1. 鏈霉親和素的純化

鏈霉親和素通常從細菌（如阿維丁鏈霉菌）發酵液中提取。通過多步色譜技術（如離子交換層析、親和層析）分離純化，獲得高純度的天然或重組鏈霉親和素。純化后的蛋白需通過SDS-PAGE和紫外吸收光譜驗證純度與濃度。

2. DyLight 594 馬來酰亞胺染料的活化

DyLight 594 MAL染料為商業化試劑，其馬來酰亞胺基團需在堿性條件下（如pH 7.5-8.5的磷酸鹽緩沖液）保持穩定。制備時需避免染料水解或氧化，通常現配現用或避光保存于低溫環境中。

3. 鏈霉親和素的馬來酰亞胺標記

將純化的鏈霉親和素與DyLight 594 MAL染料按一定摩爾比（通常為1:5至1:10）混合于標記緩沖液（如含0.1 M NaCl的PBS，pH 7.4）。反應需在避光條件下進行，溫度控制在4-25℃，持續2-4小時。馬來酰亞胺基團與鏈霉親和素表面的游離巰基（如賴氨酸殘基的側鏈）發生共價結合。

4. 未反應染料的去除

標記完成后，通過凝膠過濾層析（如Sephadex G-25柱）或超濾離心法去除未結合的游離染料。收集含標記復合物的洗脫峰，并通過紫外分光光度計測定染料與蛋白的結合比例（通常為3-5個DyLight 594分子/鏈霉親和素分子）。

5. 復合物的保存

標記后的DyLight 594 MAL鏈霉親和素需分裝后避光保存于-20℃，避免反復凍融。緩沖液可選用含0.1% BSA或1 mM EDTA的PBS，以增強穩定性。

三、結構與特性

該復合物保留了鏈霉親和素的高親和力（對生物素Kd≈10?1? M）和四聚體結構，同時引入DyLight 594的熒光特性（激發峰約593 nm，發射峰約618 nm）。馬來酰亞胺基團的引入使其能夠特異性標記含巰基的分子（如抗體、肽段），擴展其在生物檢測中的應用場景。

四、注意事項

制備過程中需嚴格控制pH、溫度及避光條件，以減少非特異性結合和染料降解。標記比例需通過實驗優化，避免過高比例導致空間位阻或熒光猝滅。

產地：西安瑞禧生物

用途：科研

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