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HIV-1 p24抗原 ELISA檢測試劑盒說明書

時間:2014-12-24閱讀:2740

HIV-1 p24抗原 ELISA檢測試劑盒說明書

 

 

本試劑盒采用夾心法原理檢測人血清/血漿、培養(yǎng)物上清中的HIV-1 p24抗原,預(yù)先采用p24單克隆抗體包被固相微孔板。若樣本中含有HIV-1 p24抗原,則與包被板結(jié)合,再加入生物素(Biotin,Btn)標記p24多克隆抗體,反應(yīng)后再加入辣根過氧化物酶標記的親和素(SA-HRP),結(jié)合形成夾心復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合的酶標記物,加入HRP底物液,讀數(shù)測量,根據(jù)臨界值判斷樣本中是否含有HIV-1 p24抗原。

 

[試劑組分]

  1. 包被板:包被有抗HIV -1 p24抗體的96孔酶標板, 2~8℃保存。
  2. 陰性對照:1.0mL/瓶;含正常人血清,防腐劑和色素,2~8保存。
  3. P24抗原陽性對照:1.0mL/瓶×1瓶;含基因工程P24抗原的人血清,防腐劑和色素,2~8保存。
  4. 結(jié)合物1:含有生物素標記的P24多克隆抗體(Btn-P24抗體)
  5. 結(jié)合物2:含有辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(SA-HRP)
  6. 底物液A:
  7. 底物液B:
  8. 終止液:
  9. 濃縮洗滌液:
  10. 封板膜:
  11. 說明書:1份。

 

[操作程序]

  1. 實驗設(shè)計:將包被板從密封袋中取出,根據(jù)所需數(shù)量在板架上放好微孔板條。設(shè)空白對照一孔,陰性對照兩孔,P24抗原陽性對照2孔,HIV抗體陽性對照2孔。
  2. 加結(jié)合物1:每孔加入結(jié)合物1  25μL。
  3. 加樣:依次加入樣品、陰性對照、P24抗原陽性對照75μL
  4. 溫育:用微量震蕩器充分振蕩混勻,用封板膜封蓋反應(yīng)板,37℃溫育60分鐘;

5. 洗板:撕去封板膜,吸干微孔板中所有液體,每孔加入稀釋好的洗滌液400μL,浸泡至少30秒,吸干。如此洗板5次,zui后在干凈的吸水紙上拍干。

  1. 加酶:空白孔除外,每孔加入結(jié)合物2   100μL。
  2. 溫育:用新的封板膜封蓋反應(yīng)板,37℃溫育30分鐘。
  3. 洗板:撕去封板膜,如上述洗板方法洗滌5次,zui后在干凈的吸水紙上拍干。

9. 加底物液: 每孔加入底物液A 50μL,底物液B 50μL,用微量震蕩器充分振蕩混勻,37℃避光溫育15分鐘。

10. 加終止液:每孔加入終止液50μL

  1. 檢測:雙波長測量

 

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