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生物分析色譜柱實(shí)驗(yàn)中易發(fā)生降解，原因幾何？
生物分析色譜柱實(shí)驗(yàn)中易發(fā)生降解，原因幾何？
某些補(bǔ)充氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品在HCl中易發(fā)生降解，特別是谷氨酰胺和天冬酰胺，正因?yàn)槿绱?，所以通常使用去離子水進(jìn)行配制，也就是說(shuō)標(biāo)準(zhǔn)配制方法不同。正確做法是將補(bǔ)充氨基酸溶解于去離子水中，如果將它們與其他氨基酸混合使用，則需要注意它們?nèi)芙庥谙←}酸中，因此需要快速使用。
此外，還注意到其他氨基酸將在酸水解條件下發(fā)生降解。其中包括色氨酸和4-羥基脯氨酸。然而，它們的降解機(jī)理不同。
請(qǐng)注意兩種氨基酸中的酰胺基團(tuán)。當(dāng)這些基團(tuán)暴露在酸中時(shí)，將水解釋放出氨。
那么機(jī)理的來(lái)源究竟是什么呢？
由于質(zhì)子H+首先進(jìn)攻酰胺的羰基氧O開始，然后經(jīng)過(guò)水合以及脫氨NH3，完成整個(gè)水解過(guò)程。經(jīng)過(guò)水解，原本的酰胺變成羧酸和游離的氨。
總之，分析的癥結(jié)就是在于補(bǔ)充氨基酸不穩(wěn)定容易在酸中水解，如果您正在從事相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，一定要注意樣品前處理不要犯錯(cuò)哦。
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生物分析色譜柱到底能不能反沖?如果色譜柱兩端的篩板孔徑相同反沖是不會(huì)有什么問(wèn)題的，從填料流失的角度來(lái)說(shuō)，粒徑為5um，而篩板孔徑為2um，這種情況下正沖反沖都不會(huì)造成填料的流失;此外，從柱子裝填的角度來(lái)說(shuō)，裝柱時(shí)是按照與柱身箭頭相反的方向裝填的，與反沖時(shí)的液體流路方向相同。