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堿性磷酸酶染色液（偶氮偶聯法）
點擊次數：2343 發布時間：2016-6-14
產品簡介：
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內，其活性所需zui適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮，還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸不萘酚，后者與偶聯重氮鹽生成有產物，定位于細胞質中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色，位于胞槳，結果較金屬鹽沉淀法可靠。
產品組成：
編號 名稱 | D2804 4×2ml | D2804 4×10ml | D2804 4×20ml | Storage | |
試劑(A):ALP固定液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT避光 | |
試劑(B): ALP孵育液 | B1:AS-BI染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃避光 |
B2:FBB染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃避光 | |
臨用前，按 B1:B2=1:1 比例混合，即為 ALP 孵育液，即配即用。 | |||||
試劑(C):核固紅染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | 4℃避光 | |
試劑(D):甲基綠染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT避光 | |
使用說明書 | 1份 | ||||
自備材料：
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
(一)、涂片或切片
1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定)，水洗。
2、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，水洗。
3、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3～5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
(二)貼壁培養細胞
1、取6孔板或其他容器培養的細胞，棄液，PBS清洗干凈。
2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3～5min。
5、PBS 清洗、鏡檢。
染色結果：
ALP活性部位 | 藍色 |
細胞核 | 紅色(核固紅)或綠色(甲基綠) |
血液、骨髓涂片結果判斷：
一般以積分報告結果，根據 100 個中性粒細胞陽性顆粒進行 0～4+計分。
細胞分值 | 染色特點 |
0 | 無顆粒 |
1 | 稍有顆粒 |
2 | 中等程度顆粒 |
3 | 多數顆粒 |
4 | 充滿顆粒 |
臨床意義：
1、類白血病反應積分明顯增高，未經治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。
2、急性細菌感染積分明顯增高，病毒感染積分多正常或減低。
3、再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS積分常減低。
注意事項：
1、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。
2、培養細胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應輕微，以免損傷或丟失細胞。
3、ALP孵育液易失效或降低陽性強度，即配即用，不宜久置。
4、復染時，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5、每次染色時，應有陽性對照片。
有效期：6個月有效。