Qiagen試劑盒203203/203205/203207/203209

高特異性擴增，所需優化次數少

• 所需優化次數少

• PCR特異性高

• 操作方便，可在室溫下構建反應體系

不同于抗體介導的方法，HotStarTaq DNA Polymerase應用化學介導的熱啟動，可確保聚合酶在PCR初始加熱階段*沒有活性。HotStarTaq DNA Polymerase提供*的QIAGEN PCR Buffer，將非特異性擴增產物、引物二聚體和其他污染降至**。一種新型的添加劑Q-Solution，可實現難擴增的模板（如GC含量高的模板）高效擴增。

Performance

每一批HotStarTaq DNA Polymerase都經過*的質量控制測試，包括：嚴格的PCR特異性和具有可重復性的試劑，即使低拷貝的靶分子也可擴增。通過檢測，HotStarTaq DNA Polymerase可確保高度特異性和在熱啟動PCR中的表現（參見"Higher specificity with different primer–template systems"、"Superior performance"和表格）。該試劑盒提供的新型PCR緩沖液使得在多種PCR條件下都維持高特異性，無需優化（參見"Tolerance to variable magnesium concentration"）。試劑盒中的Q-Solution可進一步優化PCR（參見"Amplification of difficult templates"）。總之，這些組合確保了在多種應用中的特異性擴增（參見"Effect of hot start on RT-PCR performance"和"Highly sensitive single-cell PCR"）。

Qiagen試劑盒203203/203205/203207/203209

HotStarTaq DNA Polymerase特性

濃度：5 units/µl
重組酶：是
底物類似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度：72°C條件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C條件下10 min，94°C條件下60 min
擴增效率：≥10⁵倍
5'–>3'外切酶活性：是
額外添加A：是
3'–>5' 外切酶活性：否
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNases污染：否
自啟活性：否

Qiagen203203/203205/203207/203209

Principle

HotStarTaq DNA Polymerase，一種經修飾的Taq DNA Polymerase，確保熱啟動PCR的高度特異性。該試劑盒包括新型的雙陽離子PCR緩沖液、Q-Solution和MgCl₂。

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymerase以非活性形式提供，常溫下沒有聚合酶活性。避免PCR構建和循環初始階段低溫條件下非特異性引物的延伸和引物二聚體的形成（參見"Superior performance in hot-start PCR"和"Higher specificity with different primer–template systems"）。95°C條件下孵育15分鐘即可激活HotStarTaq DNA Polymerase，這個步驟可整合入已有的熱循環程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通過提高每個PCR擴增退火過程特異性引物的結合比例，確保PCR每個循環特異性擴增（參見"Increased specificity of primer annealing"）。*的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡組合，使得該緩沖液與傳統的PCR緩沖液相比在很寬的溫度和Mg²⁺濃度范圍內都有嚴格的引物退火條件和高度的特異性，無需進行耗時的優化（參見"Tolerance to variable magnesium concentration"）。

Q-Solution

該產品同時提供Q-Solution，一種新型的PCR添加劑，通過更改DNA熔解行為促進難擴增模板的擴增。這種*的試劑可進一步優化由模板引起的表現不理想的PCR，如過多的二級結構和富含GC的模板（參見"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加劑，Q-Solution的濃度是確定的，沒有*性，并且保證PCR的純度。而且PCR中加入Q-Solution不會影響PCR的準確性。

Procedure

HotStarTaq DNA Polymerase提供高效、經優化的實驗方案，用于快速、方便的構建PCR反應體系。95°C條件下孵育15分鐘激活HotStarTaq DNA Polymerase，可以整合入已有的熱循環程序。反應可在室溫下建立，更加方便和易于使用（參見"HotStarTaq procedure"）。

Applications

HotStarTaq DNA Polymerase適合多種應用，包括各種富有挑戰性的研究，如各種擴增應用：

• 復雜的基因模板

• 復雜的cDNA模板（如RT-PCR）

• 低拷貝的靶序列（如單細胞PCR）

• 多重引物對反應

  
  

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