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感受態專題:真核細胞的轉染實驗步驟

2013-11-11  閱讀(1012)

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1.  在6孔板中接種1~3×105細胞/孔,加入2ml*培養基,置CO2孵箱中37℃培養
 
2.  待細胞長到50-80%單層時,在無菌離心管中配制如下溶液:
 
i.  溶液A:將4?g待轉染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養基中,靜置5min
ii.  溶液B:將2-25?l LipofectAMINE 稀釋到250?l無血清培養基中,靜置5min
 
3.  混合溶液A和B,輕輕混勻,室溫放置15-45min。
 
4.  用2ml無血清培養基輕輕洗滌細胞,加入0.8ml無血清培養基/孔,將脂質體復合物滴加到孔中,輕輕搖晃混勻,置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。
 
5.  用*培養基替換轉染液,繼續培養。
 
6.  24-72hr后檢測蛋白質的表達或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩定表達株。

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